， 附录》F  洁《净室生物学评价方】法 》 》 F．1  回、】排风高效过滤—风口微生物透过率 ！ — F．1．1 【 仪器设备和材【料应符合《以下要？求， 》。 1  仪器设备】 Φ【。90玻？璃平皿(或塑料【平，皿)； 【 空气微生物采】样器：(固体撞击式—采样器？、离心式采样器、液！体冲击式采》。样，器等均可使用常用】的为安德逊》。(Ande》rsen)采—样器隶属于固体【撞击式采样器)【； 《 ，。 微生物气—溶胶发生《。器(由气泵》、，油水分离《器、流量计、高效过！滤，器、喷雾器、缓冲】瓶等组成)； ！ 各《种，。玻璃移？液管、？吸管、试管、容【。器瓶：等； 计！时器(如秒》表)； 【 恒？温培养箱； — 》洁净工作台； ！ 高压蒸汽消】毒锅 ？ 2—  材料 ！ 胰：蛋，白酶大？豆琼脂培养基； ！ ： ， 生理盐水； 【 7—5％：。酒，精； ？ 菌种】(宜选用毒性—小，或没有毒性且便【于区别大气杂菌【的特定菌种》常用的有枯草—芽，孢杆菌、黏质沙雷】氏菌、大肠噬菌【体等)；《 《 采样介质—可选用？硅酮：类、石油胨类、醇】类、糖类《、纤维素类、—蛋白：类，、混合？类，、组织培养》液等； 】。 套：筒(测定回、排【风高：效过滤风口时—。需要使用罩住整个】入，口使检漏范围包【括边：框长度应使通过气】流时间为0．5【s～1s见》图F．1．1) 】 ， ？ — F．1．》。2  透过》率应按以下方—法评价 】 在回？、排风高效过滤风口！进风端加设套筒在】套筒口部发生微生物！气，溶胶在过滤》器出风面用浮游菌】法采样由回、排风高！。效过滤风口前—。后的微？生物气溶胶浓—度可计算《得出微生物透过率】 《 F．1》．3  检测步骤】应符合下列要求 ！ ： 1  制定【方案明确《评价任务制》定详细的评》价方：案包括确定》微生物气《溶胶、发生器所需的！菌液浓度、》洁净压缩空气流量】确，。定，在回：、排风高效过滤风口！出风端的微生物采】样周期？、采样次数等一【般可根据回、排风高！效过：滤风口？的尘埃颗粒物过【滤，效，率进行计算 — ： ： 2  实验准【备根据预《先，制定的评价方案准备！所需：材料、仪器设—备制作？采，样培养皿一般而言采！样细菌用《营养：琼脂培养基采—集真菌用沙》。氏或真菌选择培养】基采样病《毒用：根据病毒特》。性，配制的？采样介质 》。。 3 【 发生微生物气溶胶！将培育好的高—浓度微生物溶液一般！为(108～101！0)：cfu？／mL利用生理盐水！。按10？倍稀释法逐次稀【释至需要的》低浓度？(步骤1确定的浓】度)然后由移液管】、吸管？量取一定容积的【低，浓度微生物溶液至气！溶胶发？。生，装置的？溶液：瓶由微生物》气溶胶？发生器在回、排风高！效过滤风口的—进风端将微》。生物溶液雾化发生微！生，物气溶胶《 ， ， ？。 4  《采，样对于回、排—风，高效过？滤风口可在》其后：的出：风管道？中，采样离？排风高效过滤风【门的距离根据实【际工程？而定：原则上出风》后有所混合能—近则好采样点沿风管！宽度方向均匀—布置3点采》样周期、《采样次？数按预先制定—的评：价方案执行采样【过程中？不能中断微生物气溶！胶的发？生采样结束后—。才能：停止发生微生—物气溶胶此》后喷：雾器中？必须尚存不少于一半！的微生？物溶：液且需对剩余菌【液活性进行》。涂布法验证以修正菌！液浓：度， 》 5  培养将采好！的平皿立即盖上盖】细菌类在(35【～37)℃培养【(1～2)》d结核菌培养3周】真，菌在28℃》培养3d上述培【养时间可根据—。所采样微生》物特性而《适当调？。整培养的过》程中应定期观察培】养箱内菌落的—生长：情况避免培养箱内干！燥菌落不生长或【培，养皿内菌《落过多充分生长汇合！等情：况的：发生 ？ ： ， 6  》计数可以目》测，、电子显《微镜、菌落计—数器等对采集到且】培养好的《菌落：进行计数当采—到，的菌：。。落很多时在它们【未生长汇合前—用显微？镜及早？观察将平皿划成许】多相等的部分抽出】一部分数菌然—。后，乘以所？划份数即可得出每皿！总菌：数计数完毕后可根】据式(F．1．【31)计《算浓度 【 《 ： 《 8  消】毒灭菌实《验结：束，后需对剩余菌液以】及，所用各种仪器、设】备、平皿等》进行消毒灭》菌、：酒，精擦洗处《。理 F】．1．4  —在进行洁《净室生物学评价【时应符合以下—要求 】1  正《式试验前《应进行预备试—。验并对？各种：仪，器，进行调试和标定 】 ，。 2》  ：应进行阳性对照试】验 【3 ： 应进行阴性—对照试验 》 》4  应《在阳：。性试验？中，长菌阴性试验组【不长菌 ！5  实验过程中】应注意实验人员的安！全防护实《验，结束：后应做好各种仪【。器、设备、衣—物等的消毒灭菌处】理 6 ！ 试：验结束？后需对微生物气溶】胶发生器内的剩余】菌液活性进行—。涂布法验证修正式(！F．1．《33)中的》菌液浓度 【 7  采样周！期应设计合理—当确：定采样周期》存在一定困难时宜增！加采样次数每次采样！使，用不：同的采样周期— ：