附录F  ！洁净室生物学评【价方法 》 ， 》 ， F．1  —回、排风高效过滤】。风口微生《物，透过率 】。 F．1．1】  仪器设备和材】料应符合以下要【。。。。求 1 ！ 仪器设备 — Φ9【0玻璃平皿(或【塑料平皿)》； 空】气微生物采样器(固！体撞击式采样—器、离心《式采样器、液体冲】击式采样器》等均可使用常用【的为安？德，逊(Ander【s，en)采样器隶【属于固体撞击式采】样器)； 】 ：微生物气溶胶发生】器(由？气泵、油水分离【器、流量计、高【效过滤器、喷—雾器、缓冲瓶等组成！)； — ：各，种玻璃移液管、吸】管、试管、容器【。瓶等； 】 计时？器(如秒表)；【 ：。 恒温培养】箱； 》 洁净工作【台；：。 《 ：高压蒸汽消毒锅 ！ 《2  材《料 胰】蛋，白酶大豆琼脂培【。养，基；： 生理】盐，水； 》 75％酒精；！  菌种！。(宜选用毒性—小，或没有毒性且—便于区别大》气杂菌的特》。定菌种常《用的有枯草芽孢杆】。菌、黏质《沙雷氏菌、》大，肠噬菌体等)； 】 ？。。 采样介质可选】用硅酮类、石油胨类！、醇类、《糖类、纤维素类、】蛋白：类、混合《类、组织培养液【等，； ？ 套筒(【测定回、排风—高效过滤风口时需】。要，使，用罩：。住整个入口使检【漏范围包括边框长度！应使通过气》流时间为0》．5s～《1s见图F．1．】1)： 《 》 ？F．1．《2  透过率—应按以下方》法，评价 】在，回、排风高效过滤】风口进？风端加设套筒—在套筒口《部，发生微生物气溶【胶，在过滤器《出风面用浮》游，菌法采样由回、排】风高效？过滤风口前后—的微生物气溶胶浓】度可计算得出微生物！透过：率 ：。。 ？ F．《1．3 《 检测步《。骤应：符合下列《要求 【。 1：  制定方》案明确评价任务制】定详细的评》价方案包括确定【微生物气溶胶—、发：生器所需的菌液浓】度、洁净压》缩空气流量确定【在回、排风高效过滤！。风口出风端的微生】物，。采样：。周期、采样次数等】一般可根据回、【排风高效过滤风【口的尘埃《颗粒：物过滤？效率进行《。计算 》 2  —实验准？备根据预先制定的】评价方案准》备所：需材料、仪器设【。。备制：作采样培养皿一般而！言采样？细菌：用营养琼脂培—养基采集真菌用沙氏！或真菌选择》培，养基采样病毒—用根据病《毒，。特性配制的》采样介？质 《 ，。 3 《 发生微生物—气溶胶将培育好的高！浓度微生物溶—。液，一般为？(108《～1：。010)cfu／m！L利用生理盐水按1！0倍稀释法逐次稀释！至需要的低》浓度：(步骤1确定的浓度！)然后由移液管【、吸管量取一定容】。积的低浓度微生物溶！液至气溶胶发生【装置：的溶液瓶由微生物】气，溶胶：发生器在回》、排风高效过滤风口！的进风？。。端将微？生物溶液雾化发生】微生物气溶胶— 》 4  采样对于】。。回、排？风，高效过滤风口可在】。其后的出风管道【中采样？离排风高效过滤风门！的距离根据实—际，工程而定原则上【出风后有所混合能】近则好采样点沿风】。管宽度方向均匀【布置3点《采样周期《、采：样次：数，按预先制定的评价】方案执行采样过程】中不能？中断微生物》气，溶胶的发生采样结束！后才能停《止发：生微生物气溶胶【。此后：喷雾器中《必须尚存不少于【一，半的微生物溶液且需！对剩余菌《液活性进行涂布【法验：证以修正菌液浓度】 5  ！培养将采好的平皿】立即盖上盖细菌类】在(35～》3，7)℃培养(1【。～2)d《结核菌培养3周真菌！在2：8℃培养3d上述】培养时间《可根据所《采样：微生物特性而—适当：调整：培养的过程中应定期！观察培养箱内—菌落的生长情—况，避免培？养，箱内：干燥菌落不》生长或培养皿内菌】落过：多，充分生长汇合—等，情况的？发生 【 ，6  ？计数：可以目？测、电子显微镜、菌！落计：数器：等对采集到且培【养，好的菌落《进行计数《当采到的菌落很多时！在它们未生长汇合】前用显微镜及—早观察将平皿划成】许，。多相等的部分抽出一！部分数菌然后乘【以所划份《数，即可得出每皿—总菌数计数完毕【后可根据式(—F．1．31—)计算浓度 —。 ： 》 ！ 8  消毒灭【菌实验结束后需对】剩余菌液以及所用各！。种仪：。器、设备、平皿等进！行消：毒灭菌？、酒精擦洗处理 ！ F．1【．4  在进行洁】净室生物学》评价时应符合—以下要求 】 ：1  ？正式试验前应进行】。。预，备试验并对各种【仪器进？行调试和标定 ！ 2  —应进行阳性》对照试验 》 3—  应进行阴—性对：照试：。验 ： ， 4 — 应在阳性试—验中长菌阴性试验组！不长菌 【 5 《 实验过程中应【注，意实验人员的安【全防护实验结—束后应做好各种【仪器、设备、—衣物：。等，的消毒灭菌处理 】 《 6 ？ ，试，验结束后《需对微生物气溶胶】。发生器内《。的剩余菌《液活性进行涂布【法验证修《正式(？F．1．3》3，)中的菌液浓—度 【7  采样周—期应设？计合理当确定采样周！期，存在：一定困难时》宜增加采《样次：数每次采样使用不】同的采？样，周期 《