附录F 】 洁：净室生物学评价方】法 — 》F．1  》回、排风高效过【滤风：。口微生？物透过率 】 F．1．】1  ？。仪器设备和材料应】符合以下要求 ！ ， ：1  仪器设备 ！ Φ90玻璃！平皿(或《。塑料平？皿)； 】 空气微生》物采样？器(固体撞击式【采样器、《离心式采样》器、液体冲击式采样！器等均可使用常【用的为安《德逊：(Andersen！)采样器隶》。属于固体撞击式【采样器？)； 【 微生物气溶胶发】生器(由气泵、【油水分离器》、流：量计、高效》过滤器、喷雾—器、缓冲瓶》等，组成)； 》 ， ：。 各种玻》璃移液管、吸—。管、：试管、容器瓶等；】 计时器！(如秒表)； ！ ， ， 恒温培养箱；【 ？ 洁净工作【。台； 》 高《压蒸汽消毒锅— ？ 2《  材料 【 ： 胰蛋白酶大豆琼】脂培养基；》 ， ， 生理盐水】； 7】5％酒精；  】 ： 菌种(宜选用毒！性小：或没：有毒性？且便：于区别大气杂菌的特！定菌：种常用的有枯草芽】孢，杆菌、黏质沙雷【氏菌、大肠噬菌【体，等)； 】 ，采样介质可选—。用硅酮类《、石油胨类、醇【类，、糖类、纤维素类、！蛋白：类、混合类、组织培！养液等； 【。 ？。套，筒(测定回、排风高！效过滤风《口时需要使用罩住整！个入口？。。使检漏范围包括【边，框长度应使通过气】流时间为0》。．5s～《1，s见图？F．1．1》) 》 — F．1．2【  透过率》应按以？下方法评价 — 在回、排！风，高效过滤风口进【风，端加设套筒在—套筒口部发生微生】物气溶胶在过滤器出！。风面用浮游》菌法：采样由回、排风高效！过滤：风口前后的微生【物气：溶胶浓？度可：计算得出《微生物透过率—。 ， F．1．！3  检测步骤【应符合下列》要求 ？ ： 1  制定方！案明确评价任—务制定详细的—评价方？案，包括：确定微生物气溶【胶、发生器所—需的菌液浓》度、洁净压缩空气流！量确：定在：回，、排风？高效：过滤风口出风端【的，微生物？采样：周，期、：采样次数《。等，一般可？根，。据回、排风》高效：过滤风口的尘—埃颗：粒物过滤效率—进行计？算 2】  实验准备—根据：预先：制定的评价方—案准备？所需材料、仪器设备！制，作采样培养》皿一：般而：。言采样细菌用营养琼！脂培：养基采？集真菌用沙氏或真】菌选择？培养基采样病毒用】根据病毒《特性：配制：。的采样介质》 》 3  《。发生微生物气溶胶将！培，育好：的高浓度《微生物溶液一般为】(108～10【10)cfu—／mL利用生理盐】水按1？0倍稀释法逐—次稀释至需要的低浓！度(步骤1》确定的浓《度)然后由移液管、！吸管：量取一定容积的低浓！度微生物溶液—至，气溶胶发生装置【。的溶液？瓶由微生物气溶胶发！生器在回、排风【高效过滤风口—的进风端将微生物溶！液雾化发生微生物】气溶胶 】 4  《。采样对于回、排【风，高效过滤风口可【在其后的出风管【道中采样离排—风高效过《滤风门的距离根据】实际工程而定原则】上，出风后有《所混合能近》则好采样《点，沿风管宽度方向均】匀布置3点采样【周期、采样次数按】预先制定的评价【方案执？行采样过《程中不能中断微生物！气溶胶？的发生采《样结束后《才能停止发生微【生物气？溶胶此后喷雾器【中必须尚存不少于一！半的微生《物溶液且需》对剩余菌《液活性进行涂布法验！证以修正菌液浓度 ！ ： 5  培养】将采好的平》皿立即盖上》盖细：菌类在(35～3】7)℃培养(1～】2)d结核》菌培养3《。周真菌在《28℃培养3d【上述：培养时间可根—据，所，采样微生物特性而适！当调整培养的过程】中，应定期观察》培养箱内《菌落的生《长情况避免培养【箱内干？燥菌落不生长或【培养皿内菌落过多充！分生长？汇合等情况的发生】 《 6？  ：计数可以目测—、电子显《微镜、菌落》计数：器等对？采集：到，且培养好的》菌落进行计数当采到！的菌落很《多时在它们未生长】汇合前用《显微：镜及早观察将平皿划！成许多相等的—部分抽出一》部分数菌然后乘【以所划份数》即可得出每皿总菌】数计数完《毕后可根据式(【F．：1．31《)计算浓度》 【。 ： 】 8 ？ 消毒灭《。菌，实，验结束后需对剩【余菌液以及所用【各种：仪器、设备、—平皿等进《行消毒灭菌、酒精】擦洗处理 】 F．1．4【  ：在进：。行洁净室生》。物学评价《时应符？。合以下要《求 — 1 ？ 正式试验》前应进行预备试验】并对各种仪》器进行调《。。试和标定《 ：。 ？ 2：  应进《行阳性对《照试验 — ？3  应《进，行阴性对《照试验 】 4 ？ 应在阳性试—。验中长菌阴性—试验组不《。长菌 《 5  实验！过程中应注意实【验人员的安》全防护实验结束后应！做好各种仪器、【设备、衣物等的消毒！灭菌处理 】 6  试验【结束后需对》微生：物气：溶胶发？生器：内的剩余菌液—活性进行涂布法验证！修正式(F．—1．33)中的菌】液浓度 《。 7 【 采样周期》应设计合理当确定】采样周期存在—。一定：困难时宜增加—采样次数每》次采：样使用不同的—采样周期 》 ，