附录F 】 洁:净室生物学评价方】法
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》F.1 》回、排风高效过【滤风:。口微生?物透过率
】
F.1.】1 ?。仪器设备和材料应】符合以下要求
!
,
:1 仪器设备
!
Φ90玻璃!平皿(或《。塑料平?皿);
】
空气微生》物采样?器(固体撞击式【采样器、《离心式采样》器、液体冲击式采样!器等均可使用常【用的为安《德逊:(Andersen!)采样器隶》。属于固体撞击式【采样器?);
【
微生物气溶胶发】生器(由气泵、【油水分离器》、流:量计、高效》过滤器、喷雾—器、缓冲瓶》等,组成);
》
,
:。
各种玻》璃移液管、吸—。管、:试管、容器瓶等;】
计时器!(如秒表);
!
,
,
恒温培养箱;【
?
洁净工作【。台;
》
高《压蒸汽消毒锅—
?
2《 材料
【
:
胰蛋白酶大豆琼】脂培养基;》
,
,
生理盐水】;
7】5%酒精;
】
:
菌种(宜选用毒!性小:或没:有毒性?且便:于区别大气杂菌的特!定菌:种常用的有枯草芽】孢,杆菌、黏质沙雷【氏菌、大肠噬菌【体,等);
】
,采样介质可选—。用硅酮类《、石油胨类、醇【类,、糖类、纤维素类、!蛋白:类、混合类、组织培!养液等;
【。
?。套,筒(测定回、排风高!效过滤风《口时需要使用罩住整!个入口?。。使检漏范围包括【边,框长度应使通过气】流时间为0》。.5s~《1,s见图?F.1.1》)
》
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F.1.2【 透过率》应按以?下方法评价
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在回、排!风,高效过滤风口进【风,端加设套筒在—套筒口部发生微生】物气溶胶在过滤器出!。风面用浮游》菌法:采样由回、排风高效!过滤:风口前后的微生【物气:溶胶浓?度可:计算得出《微生物透过率—。
,
F.1.!3 检测步骤【应符合下列》要求
?
:
1 制定方!案明确评价任—务制定详细的—评价方?案,包括:确定微生物气溶【胶、发生器所—需的菌液浓》度、洁净压缩空气流!量确:定在:回,、排风?高效:过滤风口出风端【的,微生物?采样:周,期、:采样次数《。等,一般可?根,。据回、排风》高效:过滤风口的尘—埃颗:粒物过滤效率—进行计?算
2】 实验准备—根据:预先:制定的评价方—案准备?所需材料、仪器设备!制,作采样培养》皿一:般而:。言采样细菌用营养琼!脂培:养基采?集真菌用沙氏或真】菌选择?培养基采样病毒用】根据病毒《特性:配制:。的采样介质》
》
3 《。发生微生物气溶胶将!培,育好:的高浓度《微生物溶液一般为】(108~10【10)cfu—/mL利用生理盐】水按1?0倍稀释法逐—次稀释至需要的低浓!度(步骤1》确定的浓《度)然后由移液管、!吸管:量取一定容积的低浓!度微生物溶液—至,气溶胶发生装置【。的溶液?瓶由微生物气溶胶发!生器在回、排风【高效过滤风口—的进风端将微生物溶!液雾化发生微生物】气溶胶
】
4 《。采样对于回、排【风,高效过滤风口可【在其后的出风管【道中采样离排—风高效过《滤风门的距离根据】实际工程而定原则】上,出风后有《所混合能近》则好采样《点,沿风管宽度方向均】匀布置3点采样【周期、采样次数按】预先制定的评价【方案执?行采样过《程中不能中断微生物!气溶胶?的发生采《样结束后《才能停止发生微【生物气?溶胶此后喷雾器【中必须尚存不少于一!半的微生《物溶液且需》对剩余菌《液活性进行涂布法验!证以修正菌液浓度
!
:
5 培养】将采好的平》皿立即盖上》盖细:菌类在(35~3】7)℃培养(1~】2)d结核》菌培养3《。周真菌在《28℃培养3d【上述:培养时间可根—据,所,采样微生物特性而适!当调整培养的过程】中,应定期观察》培养箱内《菌落的生《长情况避免培养【箱内干?燥菌落不生长或【培养皿内菌落过多充!分生长?汇合等情况的发生】
《
6? :计数可以目测—、电子显《微镜、菌落》计数:器等对?采集:到,且培养好的》菌落进行计数当采到!的菌落很《多时在它们未生长】汇合前用《显微:镜及早观察将平皿划!成许多相等的—部分抽出一》部分数菌然后乘【以所划份数》即可得出每皿总菌】数计数完《毕后可根据式(【F.:1.31《)计算浓度》
【。
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】
8 ? 消毒灭《。菌,实,验结束后需对剩【余菌液以及所用【各种:仪器、设备、—平皿等进《行消毒灭菌、酒精】擦洗处理
】
F.1.4【 :在进:。行洁净室生》。物学评价《时应符?。合以下要《求
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1 ? 正式试验》前应进行预备试验】并对各种仪》器进行调《。。试和标定《
:。
?
2: 应进《行阳性对《照试验
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?3 应《进,行阴性对《照试验
】
4 ? 应在阳性试—。验中长菌阴性—试验组不《。长菌
《
5 实验!过程中应注意实【验人员的安》全防护实验结束后应!做好各种仪器、【设备、衣物等的消毒!灭菌处理
】
6 试验【结束后需对》微生:物气:溶胶发?生器:内的剩余菌液—活性进行涂布法验证!修正式(F.—1.33)中的菌】液浓度
《。
7 【 采样周期》应设计合理当确定】采样周期存在—。一定:困难时宜增加—采样次数每》次采:样使用不同的—采样周期
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