附》录F ？ 洁净室生物学评】价方：。法 — F．1】  回、《排风高？效过滤风口》微生物透过率 【 《 F．1．1 ！ 仪器？设备和材料应—符合以下《要求 《 1》  仪？。器设：备， Φ【90玻璃平》皿(或塑料平皿【)；： ：。 《空气微生物采—样器(固体撞击【式采样器、离心式采！样器、？液体冲击式采—样器等均可使用【常用的？为安德逊(And】ersen)采样器！隶属于固体撞击式】采样器)； 】 微生物气溶】胶发生器(由气泵】、油水分离》器、：流量：计、：高效过滤器、—喷雾器、缓冲—瓶等组成《)； 各！种玻璃移液管、吸管！、试管？、容器瓶等》；， 计时器！(如秒表《)； — ：恒温培养《箱； 【 洁净？工作台； 【 高压蒸汽消毒！锅 — 2  材料 【 胰蛋白】。酶大豆？琼脂培养基》； ： 》生理盐水；》 —75％酒精》； ： 《 菌种(》宜选用毒《性小或？没有毒性且》便于区别大气—杂菌的特定菌—种常用的有枯—草芽孢杆《菌、黏质沙雷氏【菌、大？肠噬菌？体等：)； — 采？样介质可选用—硅酮类、石》油胨类、《。醇类、糖《。类、纤维素类、蛋】白类、混合类、组】织培养液《等； ？ ， ：。 ， 套筒？(测定？回、排风高效过【。滤风口时需要使用】罩住整个入》口使检漏范围包括】边，框长度应使通过气流！时间为0．5s～1！s，见图F．1．1【)， 《 F！．1．2《  透过《率应按以下方法评】价 — ，在回、排风高—效过滤风口进风端加！设，套筒在套筒口—。部发：生微生物气》溶胶在过滤器—。出风面用浮游菌法采！样由回？、排风？高效过滤风》口前后的微》。生物气溶《胶浓度可计算—得出微？生物透？过，率 》 F．1》．3  检测—步骤应符《合下列要求 】 1  制【定方案明确评价任】务制定？详细的评价方案包括！。确定微生物气溶胶、！发生器？所需的菌液浓—度、洁净压缩空气流！量确定在回》、排风？高效：过，滤风口出风端的微生！物采样周期》、采样次数等一般可！根，据，回、排风高效过滤风！口的尘埃颗粒—物过滤效率进行计】算， —2  实《验准备根据》预先制定的评价方】。案准备所《需材料、仪》器设备制作》。采样培？养皿一般而言—采样细菌用营养【琼脂培？养基采集《真菌：用沙氏或真菌选【择培养基采样病毒用！根据病毒特性配制的！。采样介质 【 3 》 发生微生物气溶胶！将培育好的高浓【度，微生物溶《液一般为《(108～101】0，)cf？u／mL《利用生理盐水—按10倍稀释法逐】。次稀释至需》要的：低浓度(步骤1确定！的浓度)《然，后由移液管、吸管】量取一定容积的低】浓，度微生？物溶液至《。气溶胶发生》装置的？溶液瓶由微》生，物气溶胶发生器【在回、排《风，。高效过滤风》口，的进风端将》微生物溶液雾—化发生微生物气【溶胶 ？ ？ 4  采—样对于回、排—风高效？过，滤风口可在》其后的出风管—道中采样离排风高】效过滤风门的—距离根据实际工【程而：定原：则上：出风后有所混合能】。近，则好采样点沿—风管：宽度方向均》匀布置3点采—样周期、采》。样次数按预先制定】的评价方案执—行采样过《程中不能中断微生物！气溶胶？的发生采样结—束后：才能停止发生微生】物气溶胶此后喷雾器！中必须尚存》不少：。于一半的微生物溶】液且：需对：剩余菌液活性进【行，涂布法验证以修正菌！液浓度？ 5【  培养将采—好的平皿立即盖【上盖细菌类在(35！～37)℃》培，养(1？～2)d结核菌培养！3周真？菌在28℃》培养3？d，。上述培养时间可【根据：所采样微生物特【性而适当调整培养的！过程中应定期观察培！养箱：内菌：。落的生长情况—避免培养箱内干燥】菌落不生长或培养】皿内菌落过多—充分生长汇合等情况！的，发生 6！  计数可以目测】、电子显微镜、菌落！计数器等对采集到】。且培养好的》菌落进？行计数当采到的菌】落很多时《。在它们未生长—汇合前用显微镜及】早观察将平皿划成】。许多相等的部分【抽出一部分数菌然】后乘以？所划份数即可—得出每？皿总：菌数计？数完毕后可根—据式(F《．1：．31)计算浓度】 ！ — ：。 8  消毒灭菌】实验结束后需对剩余！菌液以？及所用各种》仪器、设备、平皿等！进行消？毒，灭菌、酒《精擦洗处理 【 ？ F．1．》4  在进行洁【净室生物学评价时应！符合以下要求 】 1 — 正式？。试验前？应，进行预？备试验并对各种仪】器进行调试》和，标定： 2【  应进行阳性对】照试验？ ？ 3  —应进行阴性对照试验！。 4  ！。应在阳性试验中长】菌阴性试验》组，不长菌？ ？ 5  实验过！程中应注意实—验人员的安》全防护？实验结束后》应做好？各种仪器、设备【、衣物等的》消毒灭？菌处理 【 6  试验【结束后需对微生物气！溶胶发生器内的剩】余菌液活性》进行涂布法》验证修正式(F．1！．3：3)中？的菌液浓度 【。 7  【。。采样周期应设计【合理当确定采样【周期存在一定困【难时：宜增加采样次—数每次采样使—用，不同的？采样周期 》。 ，