附录F 】 洁净室生物学【评价方法 — — ， F．1  回【、排风高《效过滤风口微生物透！过率 】 F．1．1 】 仪器设备和—材料应符合以下要】求 1 ！ 仪器设备》 Φ90！玻璃平？皿(或塑料平皿)；！。 》。 空气微生物采样】器(固体撞》击式采样器、离【心式采？样器、液体冲击式】采样器等均可—。使用常用的为—安德逊？(A：nde？rsen)采样器】。隶，属于固？体，撞击式采样器)；】 微【。生物气溶胶发生器(！由气泵、油》水分：离，。器，、流量计、高效过滤！器、喷雾器、缓冲】瓶等组？成)；？ —各种玻璃《移液管、吸管、试】管、容器瓶等； 】 计—时器(如秒表—)； ？。 ： 恒温培养【箱； 《 洁净工【作台； 】 高压蒸汽消—毒锅 — 2 《 材料 】 胰蛋白酶大豆琼】脂培养基； 【 ， 生理盐水；】 《 ，。 75％酒》精；  》 菌种—(宜选用《毒性小或没有—毒，性且便于区别大气杂！菌的特定菌种常用】的有枯草芽孢—杆菌、？黏质沙雷氏菌—、大肠噬菌体等【)； 》 采样介质可选！用硅酮类《、石油胨类》。、，醇类、糖类、—纤维素类、蛋白类、！混合类、组》织培：养液等； — 套》筒(测定《回、排风高》效过滤？风，口，时，需要使用罩》住整：个入：口使检漏范围包括】边框：长，。度应使通过气流时间！为0．？5，s～1s见图F．】1．1) —。 《 F．1！．2  透过率应】按以下方法评价 ！ 在回、排】风高效？过滤：风，口进风端加设套【筒在套筒口部发生】微生：物气溶胶在》过滤器？出风面用浮游菌法】。采样由回、排风高效！过，滤风口前后的微【生物气溶胶浓度可】计算得出微生—物透过率 》 F．1】．3  《检测步骤应》符合下列要求 【 1 【 制定？方案明确《。评价任务制定详【细的评价《方，案包括确定微生物】气，溶，胶、发生器所—需的菌液浓度—、洁净压缩空—气流量确定》在回、排风高效【过滤风口出风端的微！。生物采样周期、【采样次数《。等一：般可根据回、排风】高效：过滤风口的尘埃颗粒！。物过：滤效率？。。进行计算 》 2—  实验准》备根据？预先：制，。定的评价方案准【。备所需材料、仪器设！备制作？。采样培养皿一—般，而言采样细菌—用营养琼《脂培：养基采集《真菌：。用沙氏或真菌选【择培养基《。。采样病毒《用根据病《毒特性配制的采样】。介质 《。 3》 ，。 发生微生物气溶】胶将培育好的—高浓度微生》。物溶液？一般为(《108？～1010)c【f，u／mL利用生理盐！水按10倍稀释法】。逐次稀释至需要的低！浓度(步骤1—确定的浓度)—然后由移液管—、吸管量取》一定容积的低浓【度微生物溶液至【气，溶胶发生装置的溶液！瓶由：。微生物气溶胶—发生器在回》、排风高效过滤风】口的进风端将微生】物溶液？雾化发生微生物气溶！胶 ？。 ？ 4：  采样对于回、排！风高效过滤风口【可在其后的》出，风管道？中采样离排风高效过！。滤风门的距离根据】实际工？程而定原则上—出风后有《所，混合能近则好采样点！沿风管宽度》方向均匀布置3【点，采样周期《、采样次数按预先】制定的？评价方案执行采【。样，过程中不能中—断微生物气溶—胶的发生采样结束】后才能停《止发生微生》物气溶胶此后—。喷雾器中必须尚【存不少于一半的微】生物溶液且需对剩余！菌液活性《进行涂布法验证以】修正菌液浓度 ！ 5  培养】将，采好的平皿》立，即盖上盖细菌类【在(35～37【)℃：培养(1～2—)d结核菌培—养3周真菌》在28℃培》养3d上述培—养时：。间，可根据所采》样微生物《特性而适当调—整培养的过程—中应：定期观察培养箱内】菌，落的生长情况避免培！养箱：内干燥菌落不生长】或培养皿《内菌落过《多充分生长汇合【等情况的发生— 6 】 计数可以》目测、电子显—微，镜、菌落计》数器等对采集到且培！。养好的菌落进行计】数当采到的菌—落很多时在》。它们未生长汇合【前用显微镜》及早观察将平皿划成！。许多：相等的部分抽出一】部分：数菌然后乘》以所划份数即可得出！每，皿总菌？数计：数完毕后可根据式】(F．1．》。31)计算浓—度 ： ： ？ ？ ？ 》 8  消毒灭菌实！验结束后需对剩余】。菌液以及所用各种】仪器、设《备、平皿等进—行，消，毒灭菌、酒精—擦洗处理 【。 F．》1．4  》在进行？洁，净室生物学评价时】。。应，符合以下要求 】 1  【正式试验前》应进行预《备试：验并对各种仪器进】行调试和标》定 》 ：2  应进行阳【性对照试验 — ？ ：3  应进行阴【性对：照试验 》 ，。 4《  应？在阳性试验》中长菌阴《性试验组不长菌 】 《 5  实验—过程：中应：。注意实验人员的【安全防护《实验结？束后：应做好？各，种仪器、设》备、衣物等的消【毒灭菌处《理 《 6  试【。验结束后需对微生物！气，溶胶发生器内的剩】余菌液？活性进行涂布法验证！修正式？(F．1．33【)中的菌液浓度 】 ： 7  采样】。周期应设计合理当】确定采样周》期存在一定困—难时宜增加采—样次数？每次采样使用不同的！。采样周期 —