附录F 】 洁净室生物学评价！方法 》 【F，．1  回、排【风高：效过滤？风口微？生，物透过率《 【 F．1．1  仪！器设：备和材料应》符合以？下要求 — 1  仪器】设备 】Φ9：0玻璃平皿》(或塑料平皿—)；： ？。 空《气微：生物采样《器(固体《撞击式采《样，器、离心式采样器、！液体冲击式采样【器，等均可使用常用的】为安德？逊(Anderse！n)采样器隶属于固！体撞击式采样器【)； 】微生物？气溶胶发生》器(由气泵》、油：水分离器、流量【计、高？效过滤器、喷雾器、！缓冲瓶等组成)【； ： 各种玻璃！移液管？、吸管、试》管、容器瓶等—； 【计时器(如秒—表，)； — ：恒温培养箱；— —洁净工作《台； 【 高压蒸汽消毒锅】 2  ！。材料 《 胰蛋白酶大！豆琼脂培养基； 】 ？ ：生理盐水《； — ，75％酒精；  ！ 菌种(宜选！用毒性小或没有毒性！且，。便于区别大气—杂菌的特定菌—种常用的有》枯草芽孢杆》菌，、黏质沙《雷，氏菌、大肠噬—菌体：。等)； 《 采样【介质可选用硅—酮类、石油胨类【、醇：。类、糖类《、纤维素类》、蛋白类、混—合类、组织》培养：液等：； ？。 《。套筒(测定》回、排风高效—过滤风口《时需要使用罩住【整个入口使检漏范】围包括边框长度【应使通过气流时间为！0．5s～1—s见图F．1—．1) ！。 F．1！．2  透》过率应按《以下方法评价 】 《在回：、排风高效过滤风口！进风端加《设套筒在套》筒口部发生》微生物气溶胶—在过滤？。器出风面《用浮游？菌法采？样由回、排风—高效过滤风口前【后的微？生物气？溶胶浓度《。可，计算得出微生物透过！率 《 ， F．《1．：3  检测步—骤应符合下列要求】 1  ！制，定方案？。明确评价《。任务：制定详细的评价【方案包括确定微生】物气溶胶、发生器所！需的菌？液浓度、洁净—压缩空气流量确定】在回、排《风高效过滤风口出】风端的？微生物？采样：周期、采《样次数等《一般可？根据回、排风高效过！滤风：口的尘埃颗粒—物过滤效率进—行计算 】 2  《实验准备根》据预先？制定：的评价方案准备所】需材料、仪器设【备制作采样培养【皿一般而言采样【细菌用营养琼—脂培养基采》。。。集真菌？。用沙氏或真菌选择】培养基采样病毒用】根据病毒《特性配制的采样介质！ 3【  ：发生微生物气—。溶，胶将培育好的高浓】度，微生物溶液一般【为(：108～《。1010)cfu／！mL利用生理—盐水按？10倍稀释》法逐次稀释至—需要的低浓度(【步骤1确《定的浓度)然—后，由移液管、吸—管量取一定容积的】。低浓度微生物溶液】至气：溶胶发？生装置？的溶：液，瓶由微？生物气溶胶》。发生器在回、排【风高效过滤风—口的进风端将微生】物溶液雾化发—生微生物气溶胶【 《 ：4  采《样对于回、排—风高效过滤风口可在！其后的出《风管道？中采样离排》风高效过滤风—门的距？离根据实际工程【而定原则上》出风后有所混合【能近则？好采样点《沿风：管宽度？方向均？匀布置3点采样周期！、采：样次数按预先制【定的评价方案执【行采样过程中不能】中断微生《物气溶胶的发生采样！结束后才能》停止发生微生物气溶！胶此后喷雾器中必须！尚存不少于一半的微！生，物溶液且需对剩余菌！液活性进《行涂布法验证以修正！菌液浓度 】 ：5 ： 培：养将采好《的平皿立即盖—上盖细？菌类在(35～【37：)℃培养(1—～2)d结核菌培养！3周真菌在2—8℃培养3d上【述培养时《间可根据所采样微生！物，特性而适当调整培】养的过程《中应定？期观察培养箱内菌落！的生长？情况避免培养箱内干！燥菌落不生长—或培养？皿内菌落过多充分生！长汇合等情况—的发生？ 》 6 ？ 计数可以目—测、电子《显微镜？、菌：落计数器等》对采集到且培养好】。的，。菌落进行计数当采】到的菌落很多—时在它们未》生长汇合《前用显微镜》及，早观察将平皿划成】许多相等的部分抽】出一：部，。分数菌然后乘以所】划，份数即可得出—每皿总菌数计—数完毕后可》根据式(F》．1．31)计算浓！度 — 】 ： 8  消毒】灭菌：实验结束后需对剩】余菌液？以及所用各种—仪，器、设备、平—皿等进？行，消毒灭菌、酒—精擦洗处理 】 F．1．4 ！ 在进行洁净室【生物学评价时—应符合以下要求【 ？ 1  正式试！验前应进《行预备试验》并对各种仪》器，进行调试《和标：定 《 2 》 应进行《阳性对照试验 】 3  【应进行阴性对照【。试验 4！  应在《阳性试？验中长菌阴性试【验组不长菌 ！ 5？  实验过程—中，应注意实验人员的】安全防护实验结束后！应做：好各种仪《器，、设备、衣》物，等的消毒灭菌处理 ！ ？。 6  试验结】束，后需对微生物—气溶胶发《生，器内：的，剩余菌？。液活性？进行涂布法验证修】正式：(F．？1．33)中的菌】液浓度 —。 7  —采样周？期应设计合》。理当确定采样—周期存？在一定困难时—宜增加采样次数【每次采样使》用不同的采》样周：期 ？