附录F【。  洁净室生—物学评价方法— 》 F．【1，  回、排风高【效过：滤风口微生物透【过率 《 ， F．1．！1  仪器设—备和材料应符合【以下要求 】 1？  ：仪器设备 ！ Φ90玻璃平皿】(或塑料平皿)【；， ？ 空气》微生物采样》。。器(固？体，撞击式采样器、离】。心式采样器、液体冲！击式采样器等均可使！用，。常用的为《安德逊(And【。ersen》)采样器隶属于【固体撞击式》采样器)； 】 微生物—气溶胶发生器(由气！泵、油水分》离器、流量计、高】。效过滤器、喷雾【器、缓冲瓶等组成)！； 各】种玻璃移液管、吸管！、试管、容》器瓶等；《 ， 计时器(！如秒表)； — 恒—。。温培养箱；》 —洁净工作台； 】 高压—蒸汽消？毒锅 — 2  》材，料 【胰蛋白酶大豆—琼脂培？养，基；： 生【理盐：水； ？ 75％酒！精；  》 《菌种(宜选用毒性小！或没有毒性且—便于区别大气杂菌的！特定：菌种常用《的有：枯草芽孢杆菌、黏质！沙雷氏菌、》大肠噬菌体》等)； 【 ：采样介？质可选用硅酮类【、石油胨类、—醇类、糖类、纤维素！类、蛋白类、混合类！。、组织培养液等【； ： ： ：。 套筒(测定—回、排？风，高效过滤风》口时需要使用罩【住整个入口使—检漏范围包括边【框，长度应使通过气流】。时，间，为，0．5？s～1s见图—F．1？．1) 《 ？ ？。 F．1．！2  透《过率应按以》下方：法评价 — 在《回、排？风高效过滤风口【进，风端加设套筒—在套筒口部发—生微：生，物气溶胶在过滤器出！。风面用浮游菌—法，采样由回、排风高】效过滤风口》前后的？微生物气溶胶浓度】可计算？得出微生物透过率】 ， ： F．》1．3  》检测步骤应》符合下？列要求 — ？1  制定方案明】确评价任务制定详细！的，。评价：方案包括确定微【生物气溶胶、发生】器所需的菌液浓度】、洁：净压：。。缩空：气流量？确定在回、排风高】效过滤风口出风端的！微生：物采样？周期、采样次数等一！般，可根据回、》排风高效过滤风口】的尘埃颗粒物过滤效！率进：行计算 — 2 》 实验准《。。备根据预先制定的评！价方案准备所需【材料、？仪器设备制》作采样？培养皿一般而言采】样细菌？用营养琼脂培养基采！集真菌用沙氏或真】菌选择培养基采样】病毒用根据病毒特】性配制？。的采：。样介质 【 3？  发生微生—物气溶胶将培育【好的高浓《度微生物溶》液一般？为(：108？～101《0)cfu／mL】。利用生理盐水按10！倍稀释法逐次稀释至！需要的低《浓度(步骤1—确定的？浓度)然后由移液】管、吸管量取一定】容积：的低浓度微》生物溶液至气—溶胶发生装》置的溶液瓶由微生物！气溶胶发生》器在回、排》风高效过滤风口的进！风端将？微生物溶液》雾，化发生微生物气溶】胶 《 4 》 采样对于回、排风！高效过滤《风口可？在其后的出风管道中！采样离排风高—效过滤风门的—距离根据《实际工程而定—原则上出风》。。后有所混合》能近则好采样点【沿风管？。宽度方向《均，匀布置3《点采样周期》、，采样次数按预先制定！的评价方《案，执行采样过程中不】能中断微生物气【溶胶：的发生采样结束后】才能停止发》生微生物气溶胶此后！喷雾器中必须尚【存不：少于一半的微—生物溶？液且需对《。剩余菌液《。活性进行涂布—法验证以修正菌【液浓：度 ？ 5 —。 培养将采好—的平皿立即》盖上盖细《菌类在(35～【37：)℃培养(1～2)！d结核菌培养3周真！菌在2？8℃培养3d上【述培：养时间？可根据所采样—微生物特《性而：适当调整培》养的：过程中应《定期观察培养箱【内菌落的生长情况】避免培养箱内—干燥菌落不生长或】培养皿内菌落过【多充分？生长：汇合等？情况的？发生 》 ？6  计《数可以目测、电【子显微？镜、菌落计数器【等对采？集到且培《养好的菌落》进行：计数当？采到的菌《落很多时在它—们未生长汇合—。前用显？微镜及早观》察将平皿《划成许多相等的部分！抽出一部分数菌然】后乘以所划》份数：即可得出每》皿总菌数《计数完？毕后可根《据式(F《．1．31)计算浓！度 ： 】 ， ， 《 8  消毒灭！菌实验？结束后需对剩—余菌液以及所用各】种仪器、设备、平皿！等进行消毒灭菌、酒！精擦洗处理》 ？ F．1．4 ！ 在进行洁净室【生物：学评价时应符合以下！要求 1！ ， 正：式试验前应进—行预备试《验并：对各种仪器进行调】试和：标定 《 2  【应进行？阳性对照试验 【。 ？ 3  应进行】阴性：对照试？验 ： 4 【。 ，应在阳性试验中长菌！阴性试验组不长【菌 ： 《 5  《实验过程中》应注意实《验人员？的安全防护》实验结束后应—做好各种《仪器、？设备、衣物》等的消？毒灭：菌处：理 ？ 6  【试验结束后》需对：微生物气溶胶发生器！。内，。的剩余菌液活性进】行涂布法验证修正】式(F．1．—。33：)中的菌液浓度 ！ 7  【采样周期应设计合理！当，确定采样周期存在】一定困难时宜增加采！样次数每《次采样使用不同的采！样周：期 ？