。 附录F  ！。洁净室生《物学评价方》法 — F．1 ！ 回、排风》高效过滤风口微生】物透过率《 《。 《F．1．1  【。仪器设备和材—料应符合《以下要求 】 1 《 仪器设备 — Φ—9，0玻璃？平皿(或塑料平【皿)； 】 空气微《生物采样《器(固体《撞，击式：采样器、离心—式采样？器、液？体冲击式采样器等】均可使用常用—的，为安德逊(Ande！rs：en)采样器—隶，属于固体撞击式【。采样器)； — 微生物】气溶胶发生》。器，(由气？泵、油水分离器、】流量计、高效过滤】。器、喷雾《器、缓冲瓶等组【成)； 》 《各种玻璃移液管、】吸管、试管》、容：器瓶等； 》。 ， 《计时器？(如秒表)；— 恒【。温培养箱； 【 洁净—工，作台； ！高压蒸汽消毒锅【 ： ： ：2  材料 ！ 胰蛋白酶—大豆琼脂培》养基； 》 ： 生理盐水；【 ： ， 75％—酒精；？  ： ： 菌种(—宜选用毒性小或【没有毒？性且便于区别大【气杂菌的特》定菌种常用的—有枯草芽孢杆—菌、黏质沙》。雷氏：菌、大肠噬菌—。。体等)；《 ？ 采样》介质：可选用硅酮类、石】油，胨类、醇类、糖【类、：纤维素类《、蛋白类、混—合类、组织培养液】等；：。。 套【筒(测定回、排【。风高效过滤风口时】。需要使？用罩住整《个入口使《检漏范围包括边框长！度应：使通过？气流时间《。为0．5s～—1s见图F．—1．：1) — F！．1．2 》 透过率《应按以下方法评【价 《 在回、排【风高效过滤风口进风！端加设套筒在套【筒口：部发生微《。生物：气，溶胶在过滤》器出风面《用浮游菌《法采样由回、—排风高效过滤风口】前后的微生物气溶】胶浓度可计算得出微！生物透过《率 — F．1．3—  检测步骤—。应符合下《列要：求 1】  制定《。方，案明确评价》任，务制定详细的评价方！案包括确定微生物气！溶胶、发生器所【需的菌液浓度—、洁净？压缩空？气流量确定在回、排！。。风高效过滤风口出】风端的微生物采样周！期、采？样，次数等一般可根【据回、排风高效【过滤风口的尘埃颗粒！物过滤效率进行计算！ ？ 2  实验】准备根据预先制定】的评：价方：案准备？所需材料、仪器设备！制作采样培养皿一】般而言采样细菌【。用营养琼《。脂培养？基，采集：真菌用沙《。氏，或真菌选择培—养基采样病毒用【根据病毒特性配【制的采？样介质 《 3  】发生微生物气溶胶】将培育？好的高浓度微生【物溶液一般为—(1：08～1010)】cfu／mL—利用生理盐》水按10倍稀释法逐！次稀释至《需要的低浓度—(步骤？1确定的浓度)【然后由移液管、吸】管量取一定容积【的低浓度微》生物溶液至气溶【胶发生装置的溶液】瓶由微生物》气溶胶？发生器在《。回、排风高效过【滤风口的进风—端将微生物溶—液雾化发生微生物】。气溶胶 》 ， ： ，。4  ？。采样对于《回、排风高效过滤】风口可在其》后的：出风管道中》采样离排风高效过】滤风门？的距离根据实际工程！而，定原则上出风后有】所混合能《近则好采样点沿风管！宽度方向均匀布【置3：点采样周《。期、采样次数按预先！制定的评价方案执行！采样过程中不能【中，断微生？物气溶胶的发生采】样结束后才能—停，止发生微生物气溶胶！此后喷？雾器中必须尚存不】。少于一半《的微生物溶液且【需对剩？余菌液活性进—行涂布法验证以修正！菌液浓度 【 5《  培养将采好的】。平皿立即盖》上盖：细菌类在(35【～37)℃培养(1！～2)d结》核菌培养3周真菌】在28℃培养3d上！述，培养时间可根据【所，采样微生物特性而】适，。当调：整培：养的过？程中：应定期观察培—养箱内菌落》的生：长情况避《免培养？箱内：。干燥：菌落不生长》或培养皿《内菌落过多》充分生长汇合等情】况的发生 ！ 6  计数可以目！测、电子显微镜【、菌落计数》。器等对采《集到且培养好—。的，菌落进行计数当【。采到的菌落很多【时在它们未生长汇合！前用：显，微镜及早观察将平皿！划成许多相等的部分！抽出一？部分数菌《。然后：乘以所划份数即【。可得出每皿总菌数计！数完毕后可根—据式(F．1—．，。31)计算浓—度 — ！ ？ 8 ？ 消毒？灭菌实验结束后【需，。对剩余菌液》。以及所用各种仪器】、设备、平》皿等进？。行消毒灭菌、酒精擦！洗处理 《 》F．1．《。。。4  ？在进：。行洁净室《生物学评价时—应符：合以下要求 ！ 1  正式试】验前应进行预备试验！并对各种《仪器：进行调试和标—定 ？ 《2  应进行阳【性对照试验 【 ？ 3  应进—行阴性对《。照试验 ！4  ？应在：阳性试验中》长菌阴性试》验组不长菌 ！ 5  实—验，过程中应《注，意，实，验人员的安全防护实！验结束后应》做好各？种仪器、设备、【衣物等？的消毒灭菌处理 ！ 6  【试验结束后》需对：微，生物气溶胶发—生器内的剩余—菌液活性进行—涂布法验证修正式】(F．1．33)中！的菌液浓度 — ， 7  【采，样周期应设计合【理当确定采样—。周，期存在一定困难时宜！增加采样次数每次采！样使用不《同的采样周期 】