附录F【  洁净室生物学】评价方法 — F！．，。1  ？回、排风高效过滤】风口微生物透过【率 ： ： ， F．—1．1  仪器【设备和材《料，应符合以《。下要求 ！1  仪器》设备： 》 Φ90《。玻璃平皿(或塑料平！皿)； 【 空气微生物采样！器(：。固体撞？击，式采：样器、离《心式采样器、—液体：冲击式采《样器等均可使用【常用的为安德—逊(：。And？ers？en)采样器隶属】。于固体撞击式采样】器，)； 》 ： 微生物气溶胶发生！器(由气泵、—油水分？离器、流量计、【高效过？滤器、喷雾器—、缓冲瓶等组成)】； ： 《 各种玻璃移—。液管、吸《管，。、试管、容器瓶【等； ？ ，。 计时器【。(如秒表《)； 恒！温培养？箱； 】洁净工作台； 【 高压蒸】汽消：毒锅 2！  材料 — ？ ，胰蛋白酶大豆琼【脂，培养基； — ： 生？理盐水； ！ 75？％酒精；  】 菌种(宜【选用毒性小或没有】。毒性且便于区别大气！杂，菌的特定菌》种常用的有枯草芽】孢杆菌、黏质沙雷氏！菌、：大肠噬菌体》等)； 《 采样介】质可选用硅酮类、】石油胨类《、醇类、糖》类、纤维素类、【蛋白类、混合类、组！织培养？液等； 》。 《套筒(测《定回、排风高效过】滤风口时需》要，使用罩住整》个入口？使检：漏范围包《括边框长度应使通】过气流？时间为0《．5s～1s见【图，F．1．1) ！ ： 《。 ： F．？1．2  透过率】应按以下方法评价 ！。 ？ ：在回、排《风高：效过滤？风口进风端》加设套筒在套筒口部！发生微？。生物气？溶胶在？过滤器？出风：面用浮游菌法采样由！回、排风高》效过滤风口前后的】微生物气溶》胶，浓度可计算》得出微生物》透过率 《 ， F．1．3！ ， 检测步骤应—符合下列《要求 ？ ？ 1  制定方案！。明确：评，价任务制定》详细的评《价方案包《括确：定微生物气溶—胶、：。发生器所需的—菌液浓度、》洁净压缩《空气流？。量确定在《回、排风高效过滤】风口出风端的—微生：物采样周期、采样次！数，等一般可根据—回，、排风？高效过？滤风口的尘》埃颗：粒物：过滤效？率进行计算 — 2  】实验：准备根据预》先制定？的评价方案准备所需！材，料、：仪器设备制作采【样培养皿一般而言】采样细菌用》营养：琼脂：培养：基，采集真菌用沙氏或】。真菌选择培养基采样！病毒用根据病毒特】性配制的采样介质】 3【  发生微生物气】溶胶将培育好的【高，浓度微生《物溶液一般为(【108？～，1010)cf【u／：mL利用生理盐水】按1：0倍稀释法逐次稀释！至需：要的低浓度(—步，骤1确定《的浓度)然后由移液！。管、吸？管量取一定容积的低！浓，。度微生物溶液至气】溶胶发生装置的【溶液瓶由微生—物气溶胶发生器在回！、排风高《效过滤风口的进风端！将微生物《溶液雾？化发生微生物—气溶胶？ ？ 4  —采样对于回、排【风，高，效，过滤风口可在—其后的出风》。管道中采《样离排风高》。效过：滤风：门的距离根据实际工！程而定原则》。上出风后《。有所混合能近则好】采样点沿《风管宽度方向均匀布！置3点采样》周期、采样次数【按预先制定的评价方！案执行？采样过程中不能【中断微生物气溶胶】的发生采样结束后才！能，停止发？生微生物气溶胶此】后，喷雾器中必须尚存】不少于一半》的微生物溶液—且需对剩余菌液活】。性进行？涂布法验证以修【正菌液浓《度 5】  培养将采好的】平皿立即盖上盖【细菌类在(》35～37)℃【培养(1《～2)d《结核菌培养3周真菌！在28℃培养3d】上述培养时间可根】。据所：采样微生物特性【而适当调整培养的过！程中应？定，。期，观察培养箱内菌【落的生长《情况避免培养箱【内干燥菌落》不生长或培养皿内】菌，落过多充分生—长汇合等情况的发】生 《 6  —计数可？以目测、电子显【。微，镜、：菌落计？数器等对采集—到，且培养好的菌落【进行：计，数当采到的菌落很多！时在：它们未生长汇合前】用，显微：镜及：早观察将平》皿划成许《多相等的部分抽出一！部，分数菌然《后乘以所划份数即】可得出每皿总菌数】计数完毕后》可根据？式(F．1．—31：)计算浓度 ！ 》 】 8  消毒灭菌实！。验结束后需对剩余】菌液以及所用—各，种仪器、设备、平】皿等进行消毒灭菌、！。酒精擦洗《处理： ： ？ F．1．4 【 在进行洁净室生物！学评价时应符合以】下，要求 1！  正式《试验前应进行—预备试验并对各种仪！器，进行调试《和标定 《 《 2  应进行阳】性对照试验 ！ ， 3  应》进行阴性对照试验】 —4  ？应在：阳性：试验中？长菌：阴性试验组不长菌 ！ 《 ，。5  实《验过：程中应注意》实验人员的安全防护！实验结束后应—做好各种仪器、设备！、，。衣物等的消毒灭菌】处理 【 6：  试验结束后【需对微生物气溶【胶发生？器内的剩余菌—液活性进行涂布【法验证修正》式(F．1》．33？)中的菌液浓度【 ， 7 【 采样周《期，应设计合理当确【定采样周期存在一定！。困，难时宜？增加采样次数每【次采样使用不同的采！样周期 》