附录F 】 洁净室生物学评】价方法 】 ：。 F．1  回！、排风高效过滤【风口微生物》透过率 —。。 F．【1．1 《 仪器设备》和，材料应符《。合，以下：。要求： —1  仪《器设备 【 Φ90玻璃【平皿(或塑料平皿】)； — 空气微生物采】样器(固体撞—击式：采样器、《离心式采样器、【液体冲击式采样器等！。。均可使用常用—的为安德逊(A【nde？rsen)采—样，器隶属于固体撞击式！采样器)； 【 微》生，物气溶胶发》生，器(由气《泵、：油水分离器、流量计！。、高效过《滤器：、喷雾器《、缓冲瓶《等组成)； 】 ： 各种？玻，璃移液管《、吸：管、：试管、容器瓶等；】 计时器！(如秒？表)； — ？恒温培养箱； 【 《 洁净工作》台； 《 高压—蒸汽消毒锅 — 《 ，2，  材料《。 ： ， 胰蛋白—酶大豆琼《脂培养基《； 生理！盐水； — 75％酒【精；：  ： 《 ，菌种(宜选用毒性】小或没？有毒性且便于—区别大气杂菌的特定！菌种常用《的有枯草芽孢杆菌、！。黏质沙雷氏菌、大】肠噬：菌体等)；》 ， ？ 采样介质可选用！硅酮类、石油—胨类、醇《类、糖？类、纤维素类、蛋】白类、混合类、组】织培养？液等：； 《 ，。 套筒(测定回、！排风高效过滤风口】时需要使用罩住【整个入口使检漏范】围包括边框长度应】使通：过气流时间为—0．5s《。～1：s见图？F．1．1) 【。。 — F．1．！2，。  透过率》应按以下方法评价】 在【。回、：排风高效过》滤风口进风端加【设套筒在《套筒：口部发生微生物气溶！胶在过滤《器出风面用浮游菌法！采样：由回、排风高效【过滤风口前后—的微生？物气溶胶浓度可【计，算得出微生物透【过，率 ： 》F．1．3》 ，。。 检测步骤应—符合下列要求 ！ ？1  ？制，定方案明确评价任】务，制，定详细的评价方案】包括确？定微生？物气溶胶、发生器所！需的菌液浓》度，。、洁净？压缩空气流量确定在！回、排风高效—。过，。滤风口出风》端，的微生物采样周【期、：采样次数等》一般：。可根据回、排风高】效过滤风口的尘埃颗！粒物：过滤效率进》行计算 ！2，  实验准备根据预！先制定的评价方案】。准备所需材料、仪器！设备制作采样培养】皿一般而言》采样细菌用营养琼】。脂培养基采集真菌用！沙氏或？。真菌选择培养基采】样病毒用根》据病毒特性》。配制的采样介质 】 3—  发生微生物气溶！胶，将培育好的高浓度微！。生，物溶液一般为(1】08～101—。0)cfu》／mL利用》。生理盐？水按10倍稀释法】。逐次稀释至需要【的低浓度(步骤1确！定的浓？度)：然后：由移：。液管、吸管量取一】定容积的《低浓：。度微生物溶》液至气溶胶发生装】置的溶液瓶由—微生物气《溶胶发生器在回、排！风高效过滤风—口的进风端将微生物！溶液雾化发生微生物！气溶胶？ ： ？。 ，4  采样对于回】。、排风高《效过滤风口可在其】后的：。出风管道中采样离】排风高效过滤—风，门的：距离：根据实际工程而定】原则：上出风？后有所混合能近则】好采样点沿》风管宽度方》向，均匀布置3点采【样周期、采样次【数按预先制定的评价！方案执行采》样过程中不能中断微！生物气溶胶的发生采！样结束后才》能停止发生微—生物气溶胶此后喷雾！。器中必？须尚存不《少于一半的微生物】溶液且？需对剩余菌液活性】进，行涂布法《验证：以修正菌液浓度 】 ， 5》  培？养将采？好的平？皿立即盖《上盖细菌类在—(35？～37)℃》培养(1～2)【d结：核，菌培养3《周真菌在28℃培】养，3d上述培养—时间可？根据：所采样？。微生物特《性而：适当调整培养—。的过程中应定期观】察培养？箱内菌落的生—长情况？避免培养箱内干燥】。。菌落不生长或培养皿！内菌落过多充—分生长汇合等情【况的发？生 》 6？  计？数可以目测、—。电子显？微镜、菌落》。计数器等对采集到】且培养好的菌—落进行计数当采到的！菌落很多时在它们未！生长汇合前用—显微镜及早观—察将平皿划成许【多相等的部》分抽出一部分数菌然！后，乘，以所划？份数即可得出每皿】总菌数计数完毕后】可根据？式(F．1》。．31)计算浓【度 ： 《 》 — 8？  消毒《灭菌实验结束—后需对剩《余菌液以及》所用：。各种仪器、》设备：、平皿等进行—消毒灭菌、酒精擦】洗处：理 【F．1？．4  在进行洁】净室生？。物学评价时应符【合，以下要求《 ， 1  】正式试验《前应进？行预备试验》并对各种仪器进【。行调试和标定 【 》2 ： ，。应进行阳《性对：照试验？ 《 3？ ， ，应进行阴《性对照试验》 ？ 4  应在】阳性试验中》长菌阴性《试验组不长》菌， 5  ！实验过程中应—注意实验人员—的安全防护实验【结束后应《做好各？。种仪器、设》备、衣物等》的消毒灭菌处理 ！ ： 6  试验结束！后需对微生物气溶】胶发：生器：。。内的剩余《菌液活性进行涂【布法验证修正式(】F．1．3》。3)中的《。菌液浓度 】 7  》采样周期应设—计合理当确定采样周！期存在一定困难【时宜增加采样次数每！次采样使用不同的采！样周期 》