附》录F：  洁净室生物学评！价方法 ！ ？ F．1  —回、：排风高？效过：滤风口微生》物透过率 》 F．！。1，．1 ？ 仪器设备和材料】应符合？以下要求《 《 1  仪器【设备 》 Φ9》0玻璃平《皿(或塑料平皿【)；： 空气】微生物？。采样器？(固体撞击式—采样器、离心式采】样，器、液体冲击式采】样器等均《可使用常用》的为安德逊》(Ander—。sen)采样器【隶，。属于固体撞》击，式采：样器)； — 《微生物气溶胶发生】器(由气《泵、油水《分离器？、流量计《、高效过滤器—、喷雾器、缓冲瓶等！组成)； ！ 各种玻璃移液【管、吸管、试管、容！器瓶等； 】 ， 计时器(如秒【表)； 》 ： ：。恒温培养箱；— —洁净工作《。台； 》 高压蒸—汽消毒锅 】 ：2  ？材料 — 胰？蛋白酶大豆琼—脂培养基； ！ 生理《盐，水，； 【75％酒精；  ！ 菌种(宜选！用毒性小或》没有毒性且便于区别！大，气杂：菌，的特定菌种常用的有！枯草芽孢杆菌、【黏质沙雷氏》菌、大肠噬菌—体等)； 》 ？ ， 采样介质可选用】硅酮类、石油胨类】、醇类、糖》类、纤维素》类、蛋白类、—混合：类、组织《培养液？等； 【 套筒(测》。定，回、排风高效过滤风！口时需要使用—罩住整？个入口使检漏范【围包括边《框长度应使通过【气流时间为0．5s！～1s见图F．1．！1) 》 ？ —。F．1．《2  透《过率应？。按以下方法评价【 ， ， 在回、【排风高效过滤风口进！风端加设《套筒在套《筒口部发生微生【物气溶胶《在过滤器出风面用】浮游菌法采》样由回、排风高效过！滤风口？前后的微生物—气，溶胶浓度可计算得出！微生物透过率 ！。 ： F．1《．3  检测—。。步骤应符合下列要求！ 》 1 ？ 制定方案明—确评价任《务制：定详细的《评，价方：案包括确定微生物气！溶胶、？发生器所需》的菌液浓度、—洁净压缩《空气流？量，确定在回《、，排风高效过》滤风：口出风端的》微生：。物采样周期、—采样次数等一般可根！据回：、排风高效过—滤，风口的尘《埃，颗粒物过滤效率进】行计算 《 2—。 ， ，实验准备根据—预先制定的评价方】案准备所需材料、仪！器设备制作》采样培养皿一般而言！采样细菌用营养【琼脂：。培养基采集真菌用沙！。氏或真菌《选择培养基》采样病毒用》根据病毒特性配制】的采样介质 】 ：。 3  发生微【生物气溶《胶将培育好的高【浓度微生《物溶液一般为(【108～10—10：)cfu／》mL利？用生理盐水按1【。。0倍稀释法逐次稀释！至需要的低浓度(步！骤1确定的浓—度)：然，后由移液管》、吸管量取》一，定容积的低浓度微生！物溶液？至气溶胶发生装置】的溶液瓶由微生物气！。溶胶发生器在回【、排风高效过滤风】口的进风端将微【。生物溶液雾》化发生微生》物气溶？胶 》 4？  采样对于回、排！风高效过滤》风口可在《其后的出风管道【中采样离排风高效】过滤：风门的距离根据【。实际工程而定—。原则：上出风后有所混合能！近则好采样点沿风管！宽，度方向均匀布置3】点采：样周期、《采样次？数按：预，先，制定的评《价方案执行采—样过程中不能中断】微生物气《。溶胶的发生采样结】束后才能停》止发生微《生物气溶胶此后【喷，雾器中必须尚存【不少于一半》的微生物溶》。。液且需对剩余菌液】活性进行《涂布法验证以—修正菌？液浓度 《 5  培！养将采好的平皿【立即盖上盖细菌【类在(35～3【。7)℃培养(1【～2)d结核—菌培养3周真菌在】28℃培养3d上】述，培养：。时间可根《据所：采样微生《物特性而适当调整】培养的过程》中应：定期观察培养箱内】菌落的？生，长情况避免》培养箱内干燥菌落】不生长或培养皿内菌！落过多充《分生长汇《合等情况《的，发生 【 6  《计数可以目测、电子！显微镜、菌落—计数器等对采集到且！培养好的菌落—进，行计数当采到的【菌落很多时在它们未！生，长汇合？前用：显，微镜及早观察—将平皿划成许—多相等的部》分抽出一部分数菌然！后乘以所划份数【。即可：得出每皿总》菌数：计数完？毕，后可根据式(F【．1．31)计算浓！度 ： ？ 】 8 】 消：毒灭菌实验结—束后：需对剩余《菌，液以及？所用：各种仪器、》设，备、平皿等进行【。消毒灭菌、酒精【擦洗处理 ！ F．1《．4  在进行洁净！室生物学评价—时，应符合以下》要求 】1  ？正式试验前应进行预！备试验并对各种【仪器进？行，调试和标定 — 》2，  应进行阳性【对照试验 】 3  应进行阴！性对照？试验 【 4  应在阳性】试，验中长菌阴性试验】组不长菌 — 5  实验！过程中应注意实【验人员的《安全：防护实？验结束？后应做好各》种仪：器、：设备、衣物等的【消毒：灭菌处理 】 ：6，  试验结束后需】对微生物气溶胶【发生器内的》剩余菌液活》性进行涂布法验证】修正式(F》．1：．，33)中的菌液浓】度 — 7：  采样《周期应设计合—理当：确定采样《周期：存在一定困难时宜增！加采样次数每次采】样使用不同》的采：样周期 》