附录F 】 洁净室生物学【评价方法 【。 ， ： F．1 】 回、排《风高效过滤风口微生！物透过率 — F【．1．1  仪器】设备和材《料应符合以》下要求？。 —1  仪器设备【。 ， 《 Φ90玻璃平皿(！或塑料平皿)； ！ 空》气微生物采样器(】固体撞击式采样器、！离心式采样器、液】体冲击式采样器等均！可使用常用的为【。安德逊(《Ande《rsen)采样【器隶：属于：固体撞击式采—样，器)：； ？ ： 微生《物气溶胶发生器【(由气泵、油水分离！器、流？量计、高效》过滤器、《喷雾：器、缓冲瓶》等组成)《； — 各种玻璃移液【管、吸管、》试管、容《器，。瓶等； 】 计时器(如秒【表)：； ： ， ？ 恒温培养箱； ！ 洁净—工作台； 】 ：高压：。蒸汽：消毒：锅 — 2  材料 ！ 胰《蛋白酶大《豆琼脂培养基； 】 生—理盐水； —。 75—％酒精；  ！ 菌？种(宜选用毒性【小或：没有毒性《且，便于区？别大气杂菌的特定】。菌种常用的有—枯草：芽孢杆菌《、黏质沙雷氏菌、大！肠噬菌体等)； ！ 采样介质可！选，用硅酮类、石油胨类！、醇类、糖》。。。类、纤？维素类？。、蛋：白类、混合类、组】织培养液等； 【 ： ， 套筒(》测定回、《排风高？效过滤风口时需要】使，用罩：住整个入口使检漏范！围包括边《。框长度应《使通过气流》时间为0．》5s～？1，s见图F《。．1．1) 】 【。 F．《1．2？  透过率应按以】下，方法评价 》。 》在回、排风》高效过滤风口进风端！加设套筒在套—。筒口部发生微—生物气溶《。胶在过滤器出风【面用浮游《菌，法采样由回、排风】高效过滤风》口前后的微生物【气溶胶浓度可—。计算得出微生物【透过率 ！。F．1．3》  检测《步骤应符合下列【要，求 1 ！。 制定？。方案明确评价—任务制定详细的评】价方案包括确定微】生物气溶胶、—发生器？所需的菌液浓度、】洁净压缩空气流量】确定在回、》排风高效过滤风【口出风端的微生物采！样周期、采样次【。数等一般可根据【回，、排风高效》过滤风口的尘—埃颗粒物过滤—效率进？行，计算 ？ 2  实！验准备根《据预先制《定的评价方》案准备所需材料、仪！。器设备制作采样培养！皿一般而言》采样细菌用营养琼】脂培养？。基采集真菌用—沙氏或真菌选—择培养基采样—病毒用根据病毒【特，性配制的采样介质】 3【  发生微生物气】溶胶将培育好的高浓！度微生物溶液—一，般为(108～1】。010)cfu／m！L利用生理盐水按】10倍？稀释法逐《次稀释至需要的低浓！。度(步骤1》确定的浓度)—然后由移液管、吸】。。管量：取一定容《积的：低浓度微生物溶【液至：气溶胶发生装置的】溶液瓶？由微生物气溶胶【发生器？在回、排风高效过】。滤风口的《进，风端将？微生物？溶液雾化发生微生】物气溶胶 】 4 《 ，采样对于回、—排风高效过滤风【口可在其后》的出风？管道中采样离—排，风高效过滤风门【的距离根据》实际工程而》定原则上出风后【有所混合能近则好】采样点沿《风管宽度方向均匀】布置3点采》样周期、采》样次数按《预先制定的评价【方案执行采》。样过程中不能—中，断微生？物气溶胶《的发生采样》结，束后才能停止发生】微生物气《溶，。胶此后喷雾器—中必：须尚存不少于—一，半的微生物溶—液且需对《剩余菌？液活性进行涂布【法，验证以修正菌—液浓度 》 《5  ？培养将采好的平【。皿立即盖《上盖细菌《类在：(35～37)℃】培养(1～2—)d结核菌培养3周！真菌在28》℃培：养3d上述培养时】间可根据所采样微】。生物：特性而？。适，当调整培养的过【程中应定期观—察培养箱内》菌落的生《长情况避免培养箱内！干燥菌落《不生：长或：培，养，皿内：菌落过多充分—生长汇合等情—况的发生 ！ 6  计》数，可以目测、电子【显微镜、菌落—计数器？。等对采集到且培【养好的菌落进—行计数当采》到的菌落很》多，。。时在它们未生长【汇合前？用显微镜及早—观，察将平皿划成许多相！等的部分抽出一【部分数菌然后乘以所！划份数即可得出每】皿总菌数计数完毕后！可根据式(F．1．！31)计算浓度 】 【 》 ， ： ， 8  消毒—灭菌实验《结束：后需对剩余菌液以】及所：用各种？仪器、设备、平【皿等：进行消毒灭菌—、酒精擦洗处理 ！ F．1．4！  在进《行，。。洁净：室生物学评价时应】符合以下《要求 《 1  正式！试验前应进》。行预：备试验并对各种仪器！进行调试和标—。定 — 2：  应进行阳性对】照试验 】 3  应进行阴】性对照试验 】 4《  应在阳》性试验中长菌阴性】试，验组不长菌 ！ ， 5  实验过【程中应注《意实验人员的—安全防？护实验结束》。后应做好各种仪器】、设备、衣》物等的消毒灭菌【处理 】6  试验结束后】需对微生物气—溶胶发生器内的剩余！菌，液活性进行涂布【法验证？修正式(F．—1．33)中—的，菌液：浓度： ， 7 【 采样周《期应设？计合理当确定采【样，。周期存在一定困难时！宜增加采样次—数每：次采样使用不同的采！样周：期 ？