。 附录—F  洁净室生物学！评价方法《 ？ 《 ：。 F．1  回【、排风高效过滤风】口微生物透过—。。率 —。 ？F．1．1  【仪器设备和材料应符！。。合以下？。要求 1！  ：。仪器设备 】 Φ？90：玻璃平皿(或塑【料平皿)； 】 ， 空气微》。生物采样器(固体撞！击式采样《器、：离心式采样器、【液体冲击式采—样器：等均可使用常—用的：为安德逊(Ande！。rsen《。)采样？器隶属于固》体撞击式采样器【。)； 【 微生？物气溶胶发》生器(？由气泵？、油水分离器、流量！。计、高效过滤器【、喷雾器、缓—冲瓶等组《成)； 》。 各种玻璃移！液管、？吸管、试管、容器】瓶等； —。。。 ， 计时器(如【秒表)； 》 ， 恒温—培养箱；《 洁净】工作台；《 高压蒸！汽消毒锅 》 ， 2  【材料： —胰，。蛋白酶大豆》琼脂培养基》； ： 生—。理盐水；《 》 ，75：％酒精；  【 菌》种(：宜选用毒性小—或没：有毒性且便于区【。别大：气杂菌的特》定菌种常用的—有枯草？芽孢：杆菌：、黏质沙雷氏菌、】大肠噬菌体等)；】 》 采样介质》。可选：用硅酮类、》石油胨类、醇—类、：糖类、纤《维素类、蛋白类、】混合：类、组？。织培养液等； 【 ？ 套筒(测定回、！排风高效过滤—风，口时需要《使用罩住整个入口】使检漏范围包括边框！长度应使通过气流时！间为0．5s—～1s见图F．【1．1) 【 【 ， F．1《．2  透过率【应按以下方法评价 ！ 在回、】排风高效过滤风【口进：风端加设套筒—在套筒？口，部发生微生》物气溶胶《在过滤？器出风面用浮—游菌法采样》由回、排风》。高效过滤《风口前？后的微生物气溶胶浓！度可计算得出—微生：物透过率 】 F．1》。．，3  检测步骤应】符合下？列要求 ！1  制定方案明确！评价任务制定详细的！评价方案包括确定】微生物？气溶胶、《发生器所《需的：菌液浓度《、洁净压缩》空气流量确定在回、！排风高效《。过滤风口《出风端的《微生：物采样周《期、：采样次数等一般可】根据回、排风高【效过滤？风口的尘《埃颗粒物过滤效率进！行，计算 ？ 2  】。实验准备根据预先】制定的评价》方案：准备所需材料、仪器！设备制作采样—培养皿一般而言采样！细菌用营养琼脂培】养基采集真菌用【沙氏或真《菌，选择培养基采样【。病毒用根据病毒特】性配：制的采？。样介质 《 《 3  发生微生】物气溶胶将培育好】的高：浓度微生物溶液一】般为(108—～，1010)cf【u／m？。。L利用生理》。盐水按10倍稀【释法逐次《稀释至需《要的低？浓度(步骤》1确定的浓度—)然：后由移液管、—吸管：量取一定容》积的：低浓度微生物溶【。液，至气溶胶发生装【置，的溶液瓶由微生物气！溶胶发生器》。在回、？排风高效《过滤风口的进风【端将微生《物溶液雾化发生微生！物气溶胶 】 4  采样对于！回、排风高效过滤风！。口，可在其？后的出风管道中采样！离排风高效过滤风】门，的距离？根据实？际工：程而定原则》上出风后有》所混合能近则—好采样点沿风—管宽度方向均匀布】置3点采样周期、】采样：次数按？预先制定的评—价方案执行》采样过程中不能【中断微生物》气溶胶的《发生采样结束—后才能？停止发生《。微生：物气溶胶此》。。后喷雾器中》必须尚存《不少于一半》的微生物溶液且【需，对剩余菌液》活性进行涂布法验】证以修正菌液—浓度 ？ 》5  培养将—采好的平皿立即【盖上盖细《菌类在(3》5～37《)℃培养(1～2)！d结核？菌培养3周》真菌在28℃—培养3d《。上述培？养时间？可，根据所采《样微生物特性—而适当调整》培养的过程中应定期！观察培养《箱内菌落的生长情】况避免培养箱内干燥！菌落不生长或培养】皿内菌？落，。。。过多充分生长汇合等！情况的发生 — ： ？6  计数可以【目测：、电子显微镜、菌落！计，数器等对采集到【且培养好的菌落进行！。计数当采到的菌落很！多时在它《们未生长汇合—前用显微镜及—早观察将平皿划成许！多相等的部》分抽出一部分数菌然！后，乘，以所划？份数即？可得出每《。皿总菌数计数完毕】后，可根据式(》F．1．31—)计算浓度 】 ？ ？ 《 ？ 8  消毒灭菌！实验结束《后需对剩余菌液以及！所用各？种，仪器、？。设备、平《。皿等进行消毒—灭菌、酒精擦洗【处理 《。。 ， ： F．1．4  在！进行洁净室生物【学评：价时应符合以下要求！ 1 】 正式试验前—应进行预备试—验，并对：各种仪器《进行调试和标—定 【2 ： 应进？行阳性？对照试验 — 3》  应进行》阴性对照试》验 ： 4 【 应在阳性》试验中？长菌阴性试验—。组不长菌 【 ？5  实验过—程中应注意实验【人员的安全》防护实验结束后应】。做好各？种仪器、《设备、衣物等的消】毒灭菌处理》。 》 6  《试验结？束后需对微生物气】溶胶发生器内的【。剩余菌液活性进【行涂布法验证—修正式？(，F．1．33)【中的：菌，液浓度 ！7  采《样周期应《设计合理当确定采样！周期存在《一定困？难时宜？增加采样次数—每次采样使用不同】的，采样周？期 ？