， 附录A（规—范性附录） —细菌定量杀灭试验 ！ ： ？ A.《1  试验》原理： 《     将！规定浓度的》细菌悬液以一—定比例与酸性电解】水混合作用》至，规定的时间》后加入中和》剂终止酸性电解水】的杀：菌活性进《行活菌计数然后【与阳性对照组细【。菌悬液中《的菌落数《进行比较《以确定其《杀菌效果 》 《 A.2 【 悬液定量杀菌试验！ 《。 A》.2.？1  菌悬液的制】备 —。 A.2.1—.1  按消毒技术！规范（2002年版！）要求？将细菌繁殖体—和枯草杆菌黑色变种！。芽孢制成2×1【09CFU/—mL～9《×109《CF：U/mL《的试：验用：菌悬：液 《 A.2.1】.2  按》消毒技术《规范（2002【年版）要求将白色念！。珠菌制成2×108！CFU/mL～9】×108CF—U/mL的试验用菌！。悬液 — ：A.：2.2？  悬液定量杀菌】试验操作《程序： ？ A.》2.2.《1， ， 开启？生成器待产生—的酸性电解水中有】效成分处于稳定状态！。时，用25？0mL磨口锥形【瓶接：取满瓶后盖好瓶【盖，置20℃《±1：℃，水浴：备用 【 A.2.2.2 ！ 取消毒试验用无菌！大试管先《。加入0.05mL试！验用菌液再加入0.！0，5mL？有，。机干扰？物质混匀置20℃±！1℃水浴中5min！后用无菌吸管吸取】酸性电解水9.【9mL注入其中迅速！混匀并立即计时【 《。。。。 A.2.2.3！  待试验菌—与消：毒，剂相互作用至各预】定时间分别吸取0】。.5mL试验菌与】酸，性电解水的混合【液加：于含4.5》mL中和《剂（0.1》％硫代硫酸钠、0.！1，％，吐温8？0的生理盐》水）的试《管中混匀作用1【0min后分别吸取！1.0mL样液【按活菌？培养计数方法测定】存活菌？。数每：管样液接种2—个平皿如平板上生】。长，的菌落数较多—时可进行系列10】。倍稀释后再进行活】菌培养计数 【 A.2【.，2.4？  同？时用标？准硬水代替酸性电解！水进行平行试—验作为阳性对照【 ？ A《.，2.2.5  所有！试验样本均》在3：7℃温箱中培—养对细菌繁》殖体培养48—h观：察最终结果；对细菌！芽孢和白色念珠菌】需培养72h观察最！终结果？ 《 A.2.2【.6  试验重复】3，次（：包括对照）计—。算各组的活菌浓度（！CFU/m》L）并换算》。为对数值《（N）然《后按：式，（，A.1）《计算杀灭对数值 ！。 A.—2.3 《 杀灭对数值的计算！   】  ：计，算各组的活菌—浓度（C《FU/mL）—。并换算为对数—。。值（N）然后按式】（A.？1）计算杀灭对【数值 — KL 》=， N0 - N【。x      【    《……………………】……（A.1—）   ！ ， 式中 】    《 KL？杀灭对数《值； 【。     N0【对照：组平均活菌浓度的对！数值； 》     】Nx试验组》。活菌浓度对数—值 ： ？     计算】杀灭对数值时取小】数点后两位》。值可以进行数—。字修约但《是如果消毒》试验组消毒处—理后：平均：。生长菌落数小于1】CFU杀灭对数值即！。大于：或等于？对照组平均活菌浓度！的对数值KL≥l】g（N0） ！ ：A.2.4》  评价规定 】。 ：    》 取酸性《电解：水原液与3个作【用时间重复试验3次！在，最，短作用时间以及最】短作用？时间的1.》。5，倍时对大肠杆菌、】金黄色葡萄》球菌、铜绿假单【胞菌、枯草杆菌黑色！变种芽孢各次试【验的杀灭对数值均】≥5.00》对白色念珠菌各【次试验的杀灭对【数值均≥《4.00判定为消毒！合格 《 A.—2.：。5  注意事项【 ：。 ？。 A.2《.5.1  试验】。中所使用的》中和：剂、稀释液和培养】基等各批次均—应，。进，行无菌检查》发现有？。菌，生长则全部》试验需换《。用未污染试剂或培养！基重做 》 A.2【.5.？2 ： 进行细菌》液，定量杀菌《试验时对用于清【洗，物品的消毒或用【。于冲洗？浸泡消毒有》机干：扰物：。质采用0.3—％（3g/L）牛血！清白蛋白《对，未清洗的物品或【有机物较多的物品的！消，毒有机干《扰物采用3％—（30g/》L）牛血清白蛋白】 ：