附录A（规范】性附录）《 细菌定量杀灭试验！ ： A.】1 ： 试：验原理 —     ！将，规定：浓度的细菌悬—液以：一，定比例与酸性电解水！混合作用至规—定的时？间后加？入中：和，。剂终止酸性电解水】。。的杀：。菌活性进行活—菌计数然后与阳性对！照组细菌悬液中的菌！落，数进行比较》以确定其杀菌—效，果 】 A.2  —悬液：定量：杀菌试验 】 A.—2.1  菌悬【液的制备 — ？ A.2《.1.？1  按《消毒：。技术规范（200】2年版）要求将【细菌繁殖体和枯草】杆，菌黑色变种芽孢制成！2×10《9CFU/mL【～9×109CF】U/mL的试验用菌！悬液 ？ A.2.！。1.2  按消毒】技术规范（》200？2年版）要求—将白色念珠菌制【成2×108—CFU/m》L～9×《108？CFU/《mL的试验用菌【悬液 《 A》.2.2  悬【液定量杀菌》试验操作程》序 — A.？2.2.1 — 开启生成》器待产生的酸性电解！。水中有效成分处【于稳：定，。状态时用2》50：mL磨口《。锥形瓶接取满—瓶后盖好瓶盖置2】0℃：±1℃水浴备用 】 A.2】.，2.：2  取消毒—试验用无菌大试【管先加入0.0【5mL试验用菌液】再加入0.05【mL有机干扰物【质混匀？。置20？℃±1℃水浴—中5：min后用无菌吸】管，吸，取酸性电解水—9.9mL注入【其中迅？。速混匀并立即计【时 【。A.2.2》.3  待试验【。菌与消？毒剂相互作用至各预！定时间？分别吸取0.5【mL试验菌与酸性】电，解水的混合液—加于含4.5mL】中和剂（《0.：。1％硫代硫酸—钠、0.1％吐温】80的生理盐水【）的：试管：中混匀？作用：10min后分【别吸取1《.0m？L样液？按活菌？培养计数方法测定】。。存活菌数每管样液接！种2个平皿如平板】。上生长？的，菌，。落数较多时可进【行系列1《0倍稀释后再进【行活菌？培养计数 》 ， ： A.2.2.4！  同？时用标准《硬水代替酸性电解】水，进行平行试验作为阳！性对照 】 A.2.2—.5  所有试【验样本均《在37？℃温箱中培养对细】菌繁殖体培养4【8h观？察最终结果；对【。细菌芽孢和白—色念珠菌《需培养72h观【察最终结果 】 ： A.2.2.6】  试验重复3次】。。（包括对照）计算各！组的活菌浓》度，（C：FU/m《L）并换算为对数值！（N）然后按式（】A，.1）计算》杀灭对数《值 A.！2.3  杀灭对】数值的计《算 【 ，  ： 计算？。各组的活菌》浓度（CFU/mL！）并换？算为对？数值（N）然后【按式（A.1）计算！杀灭对数《。值 KL！ = N0 - 】Nx：。 ，    《    《 ………………【……：……（？A.1） — ？  ：   式中》 》     K—L，杀灭对数值； 】    【 ，N0：对照组平均活—菌浓度的对》数值； 》     】Nx试验组活菌【浓度对？数，值 【    计》算杀灭对数值时取】小数：点后两位值可以进】行数字修《约但是如果消毒试验！组消毒处理后平均生！长菌落数小于1C】FU杀灭对》数值：即大于或等》于对照组《平均活菌浓度—的对数值K》L≥lg（N0【） 》。 A.2.4【  评价规定 ！ ？    取酸—性电：解水原液与3个作】用时：间重：复试验3次在最短】作用：时间：以及最短作用时【间，的1.5《。倍时：。对大肠杆菌、—金黄色葡萄》球菌、铜《绿假单胞菌》、枯草杆菌黑色变】种芽孢各次》试验的杀灭对—数值均≥5.00】对白色念珠》菌各次试验的—杀，灭对数值均≥4【.00判定》为，消毒合格 】。 A.2.5 】 注意事项 ！ A.《2.5.1  【。试验：。中所使用的中和剂、！稀释液和培》养基等各批》次均应进行无菌【检查发现有菌—生，长则全部《试验需换用未污染】试剂或培《养，基重做 — A.2.5】.2： ， 进行细《菌液定量杀菌试验】时对用？于清洗物品的消【毒或用于冲洗浸泡】消毒有机干扰—物，。质采用0.》3％：。（3g/《L）牛血清白—蛋白对？未清洗的《物品或有机物—较多的物品》的消毒有机干扰物采！用3％（《30g/L》）牛血清白》蛋白 《