附？录A（规《范性附录《） 细？菌定量杀《灭试验 》 ， ， ：。 ， A.1  试验原！理 》  》   ？将规：定浓度的细菌悬【液以一定比例与酸】性电解水混合—作用至规《定的时间后加—入中：和剂终止酸性电解】水的杀菌活性进行】活菌计数然后—与阳性？对照组细菌悬液【中的菌落数进行比】较以确定其杀—菌效果？ 【 A.2  悬液定！量杀：菌试验？ A！.2.1  菌悬】液的制备《 A.】2.1？.1  《按消毒技《术规范？（2：00：2年：版）要求将》细菌：。繁殖体和枯》草杆菌黑色变—种芽孢制成2×10！9CFU/mL～9！×109CFU/m！L，的试：验，用菌悬液 — A》.2.1.2 【 ，按消毒技术规范（】200？2年版）《要求将白色念珠菌】制成：2，×108CF—U/：mL～9×1—08CFU》/mL的试验用菌】悬液 】A.2.2》  ：。悬液：定量杀菌试验操作程！序 — A.2.2—。。.1  开启生【成器：。待产生的《酸性电解水中有【。。效，成分处于稳定状态】时，用250mL磨口锥！。形，瓶接取满瓶后—。盖好瓶盖置20℃】±1℃水《浴备用 ！。A.2.2.2 】。 取消毒《。试验用无菌大试管】。先加入0《.05mL试—验，用菌液再加入0.0！5m：L有机干扰物质混匀！置20℃±1℃水浴！中5min后—。。用，无菌吸管《吸取酸性《电解水9《。.9mL注入—。其中迅速混匀并【立即计？时 A.！2.2.3  【待试验？菌与消毒剂相—。互作用？至各预定时》间分别吸取0—.5mL试》验菌：。与酸性？电解：水的：混合液？加于含？4.5？mL中和剂（0.1！％硫：代硫酸钠、》0.：。1％吐？温，80的生理》盐水）的试管中混匀！作用10《。min后《分别吸取1.0mL！样液：。按活菌培养计—数方法测定存—活菌数每管样液接】种2个？。。。平皿如平板》上生长的菌落数【较多时？可进行？系列10《。倍稀释后再进—行活菌培养计数 ！ ，。 ， A.2.2【.4  同时—用标准硬水代替【酸，性，电解水进行平行试】验作为阳《性对：。照， A.2！.2.5 》 所：有试验样本》均在37℃温箱中培！养对细菌繁殖体培养！48h观察最终【结果；对细》菌芽孢？。和白色？念珠菌？需培养72h观察】最终结果 — A.2.】2.6  试验重】复3次（包括—对照）计算各组的活！。菌浓度（CFU/m！L）并换算为对数值！（N：）然后按式（A.1！）计算？杀灭：对数值 》 ： A.《2.3 《。 杀灭对数值的计算！  【   计算各组的活！菌浓度（CFU/m！L）并换算为—对，。数值（N）然后【按式（A《。.1）计算杀灭对数！值 ？ KL =】。 N0 - Nx】   ？       【…，………？……：……：……（A《.1：）， ，  —   式中》   】  ：KL杀灭《对数值； 【 ： ，   ？ ，N0对照组》平均活？菌浓度的对数值；】。 —    Nx试【验组活菌浓度对数值！ 《。     计算杀！灭对数值时取—小数点后《两位值可以进行数】字修约但是》如果消毒试验组消毒！处理后平均生长【菌，落，数，小于1CFU杀【灭对数值《即大于或等》于对照组平均活菌】浓度的对数值KL】。≥lg（N0—） ： 《。 A.？2.4  评—价规：定 》     取酸性！电解：水原液与3个作用时！间重复试验3次在最！。短作用时间以—及最短作《用时间？。的，1，.5倍时《对大：肠杆菌、金黄色【葡萄球？菌、铜？绿假单胞菌、—枯草杆菌黑色—变，种芽孢各次试验的杀！灭对数值均》≥5.00对白【。色念珠菌各》。次试验的杀灭对数值！。均≥4.0》0判定为《消毒合？格 【A.：2.5 《 注意事项 】 A.2.5.！1 ： 试验中所使用的中！和剂、稀释液和培】。养基等各《批次均应进行无【菌检查发《现有菌？生长则？全部试验需换—用未污？染试剂或培养基【重做 】A.2.5.2 】 ，进行细菌《液定量杀菌试—验时对用《于清洗？物品的消毒或用于冲！洗浸：泡消：毒有机干《扰物质采用0.3】。％（3g/》L）牛血清白蛋白对！未清洗的物品或有】机物较多的物—品的消毒《有机干扰物采用3％！。（30？g/L）牛血清【白，蛋白 《