， 附录A（规范性附！录） 灭菌效果检】测方法 ！ A.1  方】法原理 】    —。。 本试？验，以常见的硬式—镜不锈钢《材料管腔、软式【镜聚四氟乙烯—材料管腔为模拟管腔！验，证微生物的灭菌【效果本试《验应采用两端—开口的无缝测试【管腔：如有接缝则》应保证？气密性在《管腔中央放置—染有细菌芽孢的【载体：通过半周期》灭菌循环无菌—生长：。以，嗜热脂肪杆菌芽孢为！指标菌同时进行微】生物灭菌效果评价所！。有试验均为阴性培】养结：果，则判定结《果合格 】 A.2  】。生物指示物 【 ，  —   嗜《热脂肪杆菌芽孢（】AT：CC7953） 】。。 — A.3  验【证器材 ！ A.《3.1  》载体将芽《孢液：均，匀涂布？在直径为《0.4？。m，m、长度为》20mm《～30mm不锈钢】检测材质上以—染菌后不堵塞管腔为！限嗜：热脂肪杆《菌芽孢？阳，性回收菌量应为1】×106《CFU/《载体～5×》10：。6C：FU/载《体室：温下自然干燥后再】使，。用 《 ： A.3.2  检！测管腔本试》验宜采用《两端开？。口的无缝测试管腔如！。有接缝？则应保证气》密性 A！.3.3  —不锈钢材质无—接，缝管腔10》根， ？ A.》3.4  》聚四氟乙烯无—接缝管腔《10根 】 A.3.》5  嗜热脂肪杆菌！。芽，孢，的TSB培养基干】粉胰蛋白胨17.0！g植：物蛋白胨3》.0g氯化钠5.0！g，。磷，酸氢二钾2.5g葡！萄，糖2.5g》共30g溶于1L蒸！馏水中制《成胰蛋白《胨，大豆肉汤（》TSB）培养基 】 《 A.4  】操作步骤 — A.】4.1  将—染菌：的载体送达不锈钢】管腔：的正中央制》作10？根测试样本将10根！测试样本《均匀平行《摆放在器械》盒内用？双，层无纺布包裹放置】。在，灭，菌舱内灭菌舱内如仅！。一层隔架则》10根样本》。平行摆放在器—。械盒内放置在灭菌】舱中央（见图—A，.1：）；若？灭菌：舱内可摆放上—下两层隔《架则：将10根样》本均：匀，摆放在两个器—械盒内？分别：放置在？灭菌舱内上下两【层，隔架中央（见—图A.2）》 》 ，  【   按照》消毒技？术规范（2002版！）中的灭《菌操作步骤进行半】周期灭菌《灭菌：。结束后以无菌操作】。取出：。细菌芽孢载体—均放到？T，SB培养基》中，56℃培养48【h，观，察培养结果如—无细菌生长则—继续培养至7d培】养结果仍无》细菌生长则判断【为阴性 【 A.4.—2  将染菌的体】用细丝？送达聚？四，氟乙烯管腔》的正中间制作—10根测试样本将1！0根测试样本—均匀平行摆放在器】械盒内用《双层无纺布包裹放】置在灭菌舱内灭【。菌舱内如仅一层隔架！则10根《样本平行《摆，放在器？械盒内？放置在灭菌舱—中央（见图A.3）！；若灭菌舱》内可摆放上下—两层隔架则》将10根样本均【匀摆放在《两个器械盒内分别放！。置在灭菌舱内上下】两层隔架《中央（见《图A.4） — ， 【  《   按照消—毒技术规范》（2002年版）中！的灭菌操作步骤【进行半？周期灭菌灭菌—结束后取出细—菌芽：。孢载：。。体全：部放：到，TSB培养基中【5，6℃培养《4，8h观察培养结【果如：无细菌生长则继【续培养至7d培养】结果仍？。无细菌生长则判【定阴性 】 A.5 【 结果计《。算 ： 》  ？   嗜《热脂肪杆菌芽孢【重复以上两种材质的！模拟：管腔微生物测—试各重复5次 ！ A.6 ！ 结：果判定？ 》 ：     测试【结果均？无细菌生长为阴【性则判定无菌合格】 ：