附录A(规【范性附录)》 灭菌效《果检测方法
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A:.1 方法原【。理
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【 《本试验以常》见,的硬式镜不》。锈,钢材:料管腔、《软式镜聚四氟乙烯】材料管腔《为模拟管《腔验证微生物的【灭菌:效果本试《。验,应采用两端开—口的无?缝测试管腔如有接缝!。则应保证气密性【在,管腔:中央放置染有—细菌:芽孢的载体通过半】周期灭菌循》环无菌生长以嗜【热脂肪杆菌芽孢【为指标菌同时进行微!生物灭菌效果评价所!有试:验均为阴性培养结果!。则判定结果合—格
》
A.—2 生物指—示物
《
【 嗜热脂—肪,杆菌芽孢(》ATCC《79:53)
【
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A.?3, 验证器》材
《。
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A:.3.1 》 载:体将:芽孢液均匀》涂布在直径》为0.4mm—、长度为20mm~!30mm《不锈:钢检测材质上以【染菌:后不堵塞管腔为【限嗜热脂肪》杆菌芽孢阳》。性回收菌量应为1】×1:06CF《U/载体~5—×106C》FU/载体室温下】自然干?燥后再使用》
—A.3?.2 ? 检测管腔本—试验宜采《用两端开口》的,无缝测试管腔如有】接缝则应保证气密性!
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A.?3.:3,。 不锈《钢材质无接缝—管腔10根
!。。
A.3.4 !聚四氟乙《烯无接缝管腔10】根
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A.3《.5 嗜》热脂肪杆菌芽孢的】TSB培养基干【粉胰蛋白《胨17.0g植【物蛋白?胨,3.0g氯化钠【5.0g磷》酸氢:二钾:。2.5g《葡萄糖2.5g共3!。0g溶于1L蒸馏水!中制:成胰蛋白《胨大:豆肉汤(《TSB)培养基【
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?A,.4 操作步骤
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A.!4.1? 将染《菌的载体送达不【锈钢管腔的正中央】制作10根》测试样本将10根测!试样本均匀平行摆放!在器械盒内用双层无!纺布:。包裹放置在》灭菌舱内灭菌—舱内如仅一层隔架则!10根样本平行摆】放在器械盒》内放置在灭菌—舱中央(见图A.1!);若灭菌舱内可】摆放上下《两,。层隔架则将10根样!。本均匀摆放在—。两个器械盒内—分,别放置在灭菌舱【内上下两层隔架中央!(见图A.2)【
《
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【 按《照消毒技术规范(】200?2版)中的灭菌操】作步骤?进行半周期灭—。菌灭菌结束》后以无菌操作取出细!菌芽孢载体均放到】TSB培养基中56!℃培养48h—观察培养结果如无】细菌:生长则继续培—养至:7d培养结果仍无细!菌,生长则判《断为阴性
【
A.4.2】 将染菌的体用】细丝送达《聚四氟?乙,烯管腔的正中间制】作10根测试样本将!10根测试样本均】匀平:行摆放在器械盒内用!双层无纺布》包裹放置在》灭菌舱?内灭菌舱内如仅一】层隔架则《。10:根样本平行摆放在】器械盒内放》置,在灭菌?舱中央(见》。图,A,.3);若灭菌舱内!可摆:放上下?两层隔架则》将10根《。样本均匀摆放—。在两个器械》盒内分别放置在灭菌!舱内上下两》层隔架?中央(见图A.4)!
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《
按【照,消毒:技术规范(2002!年版:)中的?灭菌操?作步骤进行半周期灭!菌灭菌结束后取【出细菌芽孢》载体全部放到TSB!。培养基中56—℃培:养48?h观:察培养结果如无【细菌生?长则:继续:培养至7d培—养结果仍无》细菌生?长则判定阴性
【
A.!5 结果计算
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嗜热脂】肪杆菌芽孢重复以上!两种材质的模拟管腔!微生物测试各—重复5?次,。
《
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:A,.6 结果判定】
【
》测试:结果均无细》菌生长为阴性则判定!无菌合格
》。
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