附录A（规【范性附录）》 灭菌效《果检测方法 — ？ ？ A：.1  方法原【。理 ： 【    《本试验以常》见，的硬式镜不》。锈，钢材：料管腔、《软式镜聚四氟乙烯】材料管腔《为模拟管《腔验证微生物的【灭菌：效果本试《。验，应采用两端开—口的无？缝测试管腔如有接缝！。则应保证气密性【在，管腔：中央放置染有—细菌：芽孢的载体通过半】周期灭菌循》环无菌生长以嗜【热脂肪杆菌芽孢【为指标菌同时进行微！生物灭菌效果评价所！有试：验均为阴性培养结果！。则判定结果合—格 》 A.—2  生物指—示物 《  【   嗜热脂—肪，杆菌芽孢（》ATCC《79：53） 【 ， ： A.？3，  验证器》材 《。 ，。 ？ A：.3.1 》 载：体将：芽孢液均匀》涂布在直径》为0.4mm—、长度为20mm～！30mm《不锈：钢检测材质上以【染菌：后不堵塞管腔为【限嗜热脂肪》杆菌芽孢阳》。性回收菌量应为1】×1：06CF《U/载体～5—×106C》FU/载体室温下】自然干？燥后再使用》 —A.3？.2 ？ 检测管腔本—试验宜采《用两端开口》的，无缝测试管腔如有】接缝则应保证气密性！ ？ ：。 A.？3.：3，。  不锈《钢材质无接缝—管腔10根 ！。。 A.3.4  ！聚四氟乙《烯无接缝管腔10】根 — A.3《.5  嗜》热脂肪杆菌芽孢的】TSB培养基干【粉胰蛋白《胨17.0g植【物蛋白？胨，3.0g氯化钠【5.0g磷》酸氢：二钾：。2.5g《葡萄糖2.5g共3！。0g溶于1L蒸馏水！中制：成胰蛋白《胨大：豆肉汤（《TSB）培养基【 》。 ？A，.4  操作步骤 ！ A.！4.1？  将染《菌的载体送达不【锈钢管腔的正中央】制作10根》测试样本将10根测！试样本均匀平行摆放！在器械盒内用双层无！纺布：。包裹放置在》灭菌舱内灭菌—舱内如仅一层隔架则！10根样本平行摆】放在器械盒》内放置在灭菌—舱中央（见图A.1！）；若灭菌舱内可】摆放上下《两，。层隔架则将10根样！。本均匀摆放在—。两个器械盒内—分，别放置在灭菌舱【内上下两层隔架中央！（见图A.2）【 《 ：  【   按《照消毒技术规范（】200？2版）中的灭菌操】作步骤？进行半周期灭—。菌灭菌结束》后以无菌操作取出细！菌芽孢载体均放到】TSB培养基中56！℃培养48h—观察培养结果如无】细菌：生长则继续培—养至：7d培养结果仍无细！菌，生长则判《断为阴性 【 A.4.2】  将染菌的体用】细丝送达《聚四氟？乙，烯管腔的正中间制】作10根测试样本将！10根测试样本均】匀平：行摆放在器械盒内用！双层无纺布》包裹放置在》灭菌舱？内灭菌舱内如仅一】层隔架则《。10：根样本平行摆放在】器械盒内放》置，在灭菌？舱中央（见》。图，A，.3）；若灭菌舱内！可摆：放上下？两层隔架则》将10根《。样本均匀摆放—。在两个器械》盒内分别放置在灭菌！舱内上下两》层隔架？中央（见图A.4）！ — 《     按【照，消毒：技术规范（2002！年版：）中的？灭菌操？作步骤进行半周期灭！菌灭菌结束后取【出细菌芽孢》载体全部放到TSB！。培养基中56—℃培：养48？h观：察培养结果如无【细菌生？长则：继续：培养至7d培—养结果仍无》细菌生？长则判定阴性 【 A.！5  结果计算 ！ 》     嗜热脂】肪杆菌芽孢重复以上！两种材质的模拟管腔！微生物测试各—重复5？次，。 《 ： ：A，.6  结果判定】 【     》测试：结果均无细》菌生长为阴性则判定！无菌合格 》。 ，