附录A(—规范性附录》) :陆生植物生长试验
!
A—.1 受《试物信息
》
!受试物信息》包括但不限于—。水溶:性、蒸汽压、—结,构式、有机溶—剂中的溶解度、正】辛醇/水的分配【系数、吸收行为【、纯度、在水和光中!。。的稳定性《、,生物:降解:试,验的结果
—
,
:
A.2 试验简】介
《
?A.2.1 试验目!的
》
《 用于评价在【一次:性施用?后土壤中固态—和液态的化》学物:质对植?物幼:苗和早期生长的潜在!毒,性效应
《
A—.2.2 》试验原理
!
本—附录用于评价在土壤!。中(或其他》合适的?土壤基质)施用【供试:品后对?出苗和较高植物早期!生长的影响种子【种入供试《品处理过土壤中在】对照组?出苗率达到5—0%后的14d【~2:1d内进行评—价终点?。测量是可见的—出苗率、苗干重(也!可为鲜重)某—些情况?下,为苗高?也要评价植物不同】部位上可见的有【害,的影:响,这些测量和观察【与未处理的》。对,照进行比较》
】 根?据可能的暴露途径】供试品混入》土壤(或可能的人】工土:壤基质?)或:喷洒在土壤表—面,这些途径要尽可【能正确代表化学品】潜在的暴露途—径土壤混合》时先进行大量—散土的混《。合然后再装入—盆中将所选植物种子!。。种入土壤中》表面施药时先将土壤!装,入盆中将种》子种好然后再喷药试!。验,体系(对照和处理】。土壤及种子)放在适!合植物生长的环【境中:
,
】 本附录可根据研】究目的测定剂量-】反应曲线或单剂量】/,比率作为《限度试验如》果单剂?量/比率试验超【出一定的毒性水平(!例如观察到》的效应高于x%)要!进,行范围筛选试—验测定毒性》高限和低限再—进行多剂量试—验产生剂量-反应】曲,。线适当的《统计分?析方法?分析获得最敏—。感参数的作用浓度E!C,x或:有效施用《率ERx(》如E:。C25、ER—25、EC》50、ER5—0)同样无作用浓】度(NOEC—)和:最低作用《浓度(LO》EC)也能》计算出来
【
A.2.【。3 参比物
—
》 定期进行】参考物质《试验以确认》随,着时间?。的推移试验》性,能和特定植物—的反应和试》验条件没《有,明显改变可选的【方法:还有实?验室:用以往的对照组生】物,量测定或生长测【量来评价试》验系:统的性能可》。以作为实验室—。内部质?量控制
《
A—.2.4《 限度
—
》 本?。附录不能《给,出由受试物蒸—发所造成的可—能伤害?结果:也,未测定由《于直接接《触植物所产生的伤】。害
?
A》.3 设备》与材:料,
?
人】工生长箱、》温室或?。植物生?长箱:生长容器《应为塑料器皿或瓷】。。盆钵
—
A.4 试验操!作
—
A.4.1 准备!自然土/人工基质
!。。
:
,
—可用含1.》5%以上有》机碳(有机质约3%!)的沙壤土》、,壤质沙土或沙质【黏壤土装入花盆【种入植物含1.5%!以上有?机碳的商业》盆栽土或合成混合】土,均可用如《果,供试品黏土有很高】。。。的,亲和力则不可用黏】土耕:地土应过2mm【筛使:之均:一并去除《粗糙颗粒《最终准备土壤的【类型和构造、有机】。碳、p?H、盐含《量和:电,导率应报告》土壤应巴氏消毒【或热:处理消毒以减—少土壤病菌的影【响
】 由于》物理/化学》特征和微《生物群落的》改变自然土》可,能使结果的》解释复杂化》增加变异性》这,些变异依次为土壤持!。。水,能力:、化学结《合能力、通风、【营养和?微量元素含量除【了,物理因素的变异【外在化学特性上的变!异如pH和氧化还】原电位可以影响供】试品的生物可用性
!。
》。 为尽可能减!少自然土《的变异性对》试验带?来的误?差,当受试物不是—植物保?护产品时可用人【工,基质代替自然—。土进行试验所用基】质应包含惰性物质减!少与:供试品、溶剂载【。体或:两者的?相,互反应用酸洗过的】。石英砂、矿物丝和玻!璃珠(如直径0.3!5mm~0.85m!m)是合适》的,惰性物质可》减少对供试品—的吸收保证》供试品最大》可能地经根》吸收达到幼苗—不适合的基》质包括蛭石》、,珍珠岩或其他—高吸收性的》材料应提供植—物生长所需的营养】以保证植《物没有营养缺乏的压!力可通过化学分【析或对照植》物的可见评价进【行评价
—
:
A.4.2 【供试植物
【
,
选择】植物的种类应考【虑其在植物界—中分类?学,上的多样性、分布】特征、种《的特定生活》史和自然《界分布地区差异【。。具体包括下列—特,征
—
, 《有均一?的种子?从,可,靠的标准《种子来源获》得能产生持》续、可靠和一—致的萌芽以及一致的!幼苗:生长;?
:
:
? ?植物应适于在实验】室进行试验》在实验室内及实【验室之间能够得出】可靠和可再现的结】果;:
《
—所用种的敏感—。性,应与环境暴露中的植!物反应一致;
【
《
: 所选种—已用以往的一些毒性!试验它们在》如除:草剂生物测定、重金!属筛选、《盐度或矿物压—。力试验?或,植,物相克研究中的【使,用表明对宽》泛,多样性?刺激:存在敏感《度;
【
:。 ?能够适应试验方【法中的?生,长条件;
!
符—合试验有《。效性标?准
—
试验【所用:的种类数量根—据相关的管理—要求决?定附录C中的—。植物测?试试验用物种供参考!
,
》A.4.《3 供试品的施【入
—
》供试:品,应添加到适》当的载体上(—如水、丙酮、乙醇】、聚乙二醇》。、,阿,拉伯:树胶:、砂:。。)也可用包含有【效成:分和各种助剂的制剂!进行试验
!
A.4《.4 与《土壤/人《工基质的《混合
! 溶于水或【可悬浮在水中—的,。物质可以直接配成】水,溶液然后将》水溶液与土在适当的!容器中混合此种类型!试验适合化学—品通过土壤或—土壤毛细水吸—收涉及根的》吸收供试品添加量】不应超?过土壤持《水,力每个浓度添—加,的溶液量《应一致但《要,注意避免《。土壤结?块,
! 水溶性低》的物质应《先溶:入适:。当的挥发性溶剂中】(,如丙酮、乙醇)并】。与沙混合用气流【将溶剂从《沙中:。去除处理的沙—子与试?验土:壤混合设置》只加沙?子和溶?剂的:溶剂对?照各处理和》溶剂对照《应加等?量的混入溶剂并【已去除?溶剂的沙子对于固体!和不溶于《水的供试品直—接和:干,土混合此后将—土加入容器中并【立,即种入种子
!
《 用人工基质【代替土壤《时在试验开始—前可直接将溶于水】的化学?。品溶解?到营养液中不溶【于水但可以通—过溶剂?。载体悬浮于水中的】。可加入载体再溶于】营养液中不溶于水但!没有无毒的水—。溶性载体可先溶于】适当的挥发性—溶剂溶液与沙子或玻!。璃珠混合在旋转蒸】发仪上蒸《发使化学品均匀【地覆着在沙粒或珠】子上在分装之前【取,一部分称重的玻璃】珠用等量溶》剂提取进行化学分】析
》
A.4.5 】表面施用
—
】对于作物保》。护产品通常用土【壤表面喷洒》试验溶液的方法进行!施药:进行:试验操作的所有【设备包括准备—和喷洒?供试:品,的设备?都应使试验以精确】的方式?进行能够产》生可重现性覆—盖覆盖应均一分布】在土壤表面》应避免化学品被设备!吸收或与《设备反应的可能(】。如塑料管与亲脂性】化学品易反应或某些!化学品对钢材—质设备有腐蚀性)模!仿典型的喷》雾器:将供试品喷洒在土】壤表面通常喷洒量】应,在,正,常农:用量的范围内用量】(水的量等)应报告!选择喷嘴《类型以保证均一的土!壤表面?覆盖量如果应用【溶剂:和载:。体应设置溶》剂/载体对照—不必试?验作物?保护产品的》制剂
A!.,4.6 供试品【浓度/?比率的验证
—
《
浓度【应经适当的分析方法!验证对于可溶性物】质所有浓度》的验:证可以?通过分析用于逐【级稀释的《最高浓度来确认用】校准设备(》。如校准分析用玻璃器!具,、校准喷雾》设备)进《行逐级稀释对—于,不溶于水的物质分】析,添加:到,土中的量如果—。要证明?供试品?在土壤?中的均一性有—。必要:进行土壤分析—
,
A.4】.7 试验》条件
【
》试验条件应与试验】。种和变种的正常生长!条件相似出苗—。的植物应放在可控的!气候培养箱、人工】气候箱或《温室中进《行园艺操《作维持正常生长【采,用生长设备时应【。保证植?。物正常生长并与对】照组:对照;应《记录包?。括条件控制和足够频!率(如每日》)的:温度、相对湿度、二!氧化碳浓度、光【(照度、波长、【光,合,有效辐射《)/:光周期、《平均灌溉《量等参数温室温度通!过通风、升》温和/或制冷—系统:来,控,制下:列条件?通,常为温室试》验的推荐条件
】
》 : 温度(22±1】0)℃;
!
相对湿度!(70±25—)%:;
》。
《 光周期》最少16h光照;
!
《
照—度(24850【±3:55:0)lx如果—照度降?。到1:42:00 lx以—下波长400nm】~700n》m除某些种需减【少照度外需补充【光照
—
,
, 试验期间应!监测和记录环境条】件试验?所用容器应为—无孔塑料或玻—璃容器容器下面【应垫上托盘或碟子容!器应定期重新摆放】以减:少植物的《生,长差异(因为—生长设?。施的试验《条件不同)容—器,应足够大以》保证正常《生长
】。 为维持【好的植物活力可以】添加土壤营》养液通过观察—对照植?物判断添加》营养液的需要和时机!推荐从试《验,容器底部浇水(如】用玻璃纤维丝—)
《
对试!验植物种《和供试品来说—特定的生长》条件是适合的(【参见附录D)对照和!。试验组?植物应放《置在一?样的试验环境条件】下然而应采取必要】的措施防止》不同处理间及对照】与供试品间的—交叉污染《(如挥发物质)
】
A—.4:.8: 试:验,操作:。
A.】。4.8?.,1 试验设计
!
?。 同》样种类的种》子种:植于容器《中每个容器》中种入的种子数目】应,根据植?物种类、容》器大小和《试验周期决》定试验期间》给植物?。提供充分的生—。长条件避《免过于拥挤根据种子!大小最大的》植株密度为》3粒/10》0cm2~1—0粒/1《0,0cm2例如每个】直径:为15cm的—容器内可种1—株~2株玉米、【大豆、西红柿—、黄瓜或甜菜;可】种3株?。油菜:或豌豆?;可种?5株~?10株洋《。葱、小麦或》其他小粒种子种【子数:量和重复容器—(一个重复指一【个容器容器内的【植物不是重》复)应足以采用理】想的统计分析方法进!行,。统计每个重复用很少!的大:种子比每《个重复用小种子时】变异会较《大应标记可以通过】每,。个容器内同样—数量的?种子:降低变异《
— 设置对照组!保证观察到的—效,应与暴露《。的供试品有关或【由供试?品引起除了不暴【露于供试品外适当的!对照组应与试验组】在各方面都一样所有!被试植物包括对照】均应来?。自同一来源为—避免偏离《对照:和试验?组植物应随机—分布
》
— 应避免使用杀【虫剂或杀菌》剂包被的种子(即“!包衣:”种子)特殊情况】下允许使《用某:些非:内吸性接触杀菌剂】(如克菌丹、福【美双)?如果:有种生病菌可—以把种子在5—%,次氯酸盐中浸—。一下然后在流水【下漂:洗再晒干允许其【他作物?保护产品的非治疗性!处理
《
《A.4.8.2 单!浓,度/比率试验
】
《 进行—单浓度?试验(限度试验)时!未确定适当》供试品浓度需要考虑!很多因素对一般化学!品来:。说,应考:虑物:质的:物,理/化学《特,。性对作物保护—产品而言需》要考虑物理/—化学特?性、供试品》的使用模式、最大】浓,度或施用比率—、每个?生长季节施用次【数和/?或试用品的持久性】为,测定一般化》学品是?否有植物毒素—特性通常以1—000mg/k【g干土作为最—大剂量
《
A.4】.8.3 预试【验
?
— 进行《。正式的多《浓度的剂量反应研】究前需先进》。行预试验确》定剂量范围预试验】的浓度间距应较【宽(如?0.1mg/k【g、1?.0mg《/kg、《10mg/kg、1!00mg/kg和】1,00:0m:g,/kg干土)—作物保?护产品的浓度应根据!推荐或最大使—用浓度或施用比率确!定如推荐/》最大浓度或施—用比率的《1/100、1/】10和1/1—
,
A.4】.8:。.4 多浓度/比率!试验
《
?
?。 多?浓,度/比率《。试验的目的是建【立剂量反应关系【和测定萌芽率、生物!量的:EC:x或ERx值和/】或与未给药的对【照组:比较的可观》察效应
》
:。。
,
试验浓】度/比率的数量和间!距应足够产生可信的!剂量反?应,。。关,系和回归线性方程】并,能得出估《计的ECx》或ERx《值所选浓度》数量至少五个几何】级数:并加上对照相邻的】两个浓度梯度不应超!过,3个:几,何级每个处理和对】照均至少有四个平行!总的种?子数应至《少20粒对》。某些萌芽《率低的植物或—多样化?。。的生长特征的植物】增加平?行数提高《统计效力《
,
A.4.!。8.5 《。观察
—
在观察!期内即对照(溶剂】对照)出苗率达到】50%后的1—4d~?21:d内定期《(至少?1周若可能每—日):观察植物是否出苗】和可见的植物中【毒死亡在试验结束时!。记录出苗率、存活植!物的生物量和—植物不同部位可见的!毒害效应后》者包括已出幼苗形态!上的异常、生—长迟缓、枯》萎、变色《。、死亡和《植物发育上的—影,。响最终生《。物量通过测定最终】存活植株的平均苗干!重完成收割土壤【表面:以上的植株》在60℃烘干至恒】。定的质量《也可选择以鲜重【作为:最终生物量如有特】。殊要:求苗高可作为另【一个重点指标可【用,。一个统?一的评分《系统对可《见的伤害《。进行评分《来评价可《观察的?。毒性反应《
A【.5 质《。量控:制
:
!为保:证试验的有效性【对照应?。符合下列形》态标准?
,
!出,苗率:至少7?0,%;
—
? 幼苗没有【可见的?植物:毒素影响(如—变色病、坏死病【、枯萎、叶》子和茎的畸形)个别!种类的植株在—生长和形态上只有】正常变异《;
?
】试验期间对》照组幼苗《平均存?。活率应高于90【%;
! 特定》。种类的环境条件应一!样生长介质包含等量!的人工?土,壤基质、支》。持介:质或同样来》源的:物质
】。A.:6 数据和报告【
A【.6.1 数—据处理?
:
?
A.6.》1.1 单浓—。度/比率试验—
! 每个植物种的数】据都应用适当—的统计方法进—行分析报告试验浓】度/比率产生的【效应水平或》试,验浓度/比》率下未见《效应(如在》y浓度或比》率观察?的效应<x%)
】
A.6.!。1,.2 多浓度/【比率试?验
《
? 根据回归方!程剂量?。-,反应关系可用不【同的模型如出苗【率等计数型数据EC!x或ERx(如E】C25?、ER2《5、EC50或ER!。50)?和置信限的估算可用!逻辑回归法》、概率法《、韦博法、寇氏法】进,行统计;幼》苗生长(质量和高度!),等连续?型终点指标E—Cx或ERx和【可,信限的估《算可用适当的回归】分析(如《B,r,uce-Vers】tee?g非线性回》归分析?)如果可能R2值为!0.7或《再高些对多数—敏感种来说》所,设浓度/比率包含2!0%和80%—效应:如,果要求NOEC要求!有更强大的分—析性试验并》。且要在数据分布基】础上选择《
》
A:.6.2 》试验报告
【
》 , 试验报告应—包括试验结果、【试验条?件的详细描述、结果!的全面?讨论、数据的分析和!结果分析《提供结果图表—和,摘要通常包括—下列内容
》
《。
a)供试!。品
】 ?。化学鉴定数》据相:关物质特性(如可能!正,辛醇/水的分配【。系数1gP》ow、?。水溶解度、蒸汽压、!环境归宿和行—为的信息);
】
:
》。 ,试验溶?液的制备细节和【试验:浓度的验证》
】。 , b)试验植—物种
! ?。试,。验生物的详细资料】种/亚种《、所属植物科—、学名和通用名、尽!可能详细的》来源:和历:史(:即提供者《。的名:称、萌?芽率、种子尺寸级别!、批号、产种年或选!择的生长季》。节、:萌芽期等《。级)、生《存力等;
】
—所试:验的单子叶和—双子叶种的数量【;,
》。
: : 选择?。此种的理《由;
?
,
《 种子贮存、!处理和维护的描述
!
— ?c)试验条件
【
】 试验设施(如生】长箱、人工气候【。箱和:室温);
】
,
试—验系统的描》述(如容器直径【、容器材料和土壤量!);
! 土壤特—性,(,土壤:。质地:或类型?土壤颗粒分布—和,分级、物理化学特征!包括:有机物含量、—有,机碳含量和pH值】);
》
【。试,验前土?壤/基质(如土【壤、人工土壤、【沙子和其他)—。的制备;
】
《 若用营养—液配方描述》;
?
?
《 供试品的施用【施用方法《、设备、《。暴露承载量和体积】(包:括化学验证、校准方!法):、施药期间环境条件!的描述;
【
:
生—长条件照度、—光周期、最高/最】低温度、浇》水,时间表和方法、施】肥;
?
?
? 每个》容器内的《种子数?量,、每:。个,剂量植?株数、每个暴露【率的重复《数;
【。
: 对照的—类型:和数量(阴性对【照,和,。/或阳?性对照、溶剂对【照);
】
: 试验周—期
《。。
,
: ? d)结果
】
,。。
每个重!复、试?验,浓度/?比率和种子的所【有终点数据表;【。
》
》与对照比《较的萌芽数量和萌芽!率;:
《
植株生!物量(植株干—重或鲜重)测定值】。与对照比率;—
?
若测!量植株高度》与对照的比率;【
:
【 与对照比较的【由供:。。试,品引发?的可见的伤害—率和可见的》。定性:定量描述(黄化【、坏死、枯萎、叶和!茎的畸形和缺—乏症);
【
? : 如?果提:供可:见伤害评分标准【判断可见伤害—描,述;
—。
《 对于《单剂量?试,验应报告伤害率;】。
《
:。 ? ECx或E—Rx(如E》C50、ER5【0、EC25、ER!25)值《和,相关置信限如果有】回归分?析提:供,回,归方程标准偏差【单,个参:数估计?。标准偏差(如—斜率、?截距);《
《。
》 若计算NO—EC(和LOEC)!值;
—
统【。计过程和假》设检验的描述;【
! 数据表和试验种】的剂量-反》应关系图
】
? , 试验过程中与】方法的偏离》和试验?中不可预见的情况】的,描述
《