安全验证
附录A(规范性!附录) 《陆生植物《生长试验 【 : A.1 受试物】信息 —     —受试物信《息包括但不限于【水溶性、蒸汽—。压、结构式、有机溶!。剂中的溶解度—、正辛醇《/水的分配系—数、吸收行为、纯】度、在水《和光中的稳定性【、生:物降解?试验的结果》 A【.2 试验简—介 ? A.—2,.1 试验目的 】    】 用于评《价在一次性施用后】土壤中固态和液【态的化学物质对【植物幼?苗和:早,期生长的潜在毒性效!应, 《 , A.2.2 试验!。原理 》   》 , ,本,附录用于《评,价在土?壤中(?或其他合适的—土壤基质)施用【供试品后对出苗【和较高植物早—期生长的影响种子】种入供试品处—理,过土壤中在对照组】出,苗率达到5》0%后的14d~】21d内进行—评价终?点测量是可见的出】苗率、?苗,干重(也可为鲜【重)某?些情况?下为苗高也要评【价植物不同部—位上可见的有害的影!响这些测量和—观察:与未:处理的对照进行比较! , 》  :  根据可》能的暴露途径—供试品混入土—壤(或可《能,的,。人工土壤基质)或喷!洒在土壤表面—这些途?径要尽可能》正确代表化学品潜】在的:暴露途?径土壤混合时—先,进行大?量散:土的混合然后再【装入盆中将所选植】物种子种入土壤中表!面施药?时,先将土壤装入盆中】将种子种好然—后再喷药试验—体系(对照和处【理,土壤及种《子)放?在适合植物生长的环!境中 《  》   本附录—可根据研究目—的测定剂量-反应】曲线:或单:剂,量/比率作为—限度试?验如:。果单剂量/比率试验!超出一定的毒性水】平(例如观察到的效!应高于?x%)要进行—。范,围筛选试验测定毒性!高限和低限再—进行多剂《量试验产生剂量【-反:应,曲线适当的》统计分析方法分【析获得最敏感参【数的作用浓》度ECx《或有效施用率ERx!(如EC《25、?ER25《。、E:C50、ER—50)同样无作【用浓度(NOE【C)和最低作用浓度!。。(,LOEC《)也能计算出来【 ? ,。 A.2.3【 参:比,。物 ? 《   ?。 定期进行参考物】质试验以《确认随着《时间:的推移试《验性能和《特定植物的反—应和:试验条件《没有明显改变可【选的方法还有实【验室用以往》的对照组生物量【测定或生长测—量来评价试验系【统的性能可以作为实!验室:内部:质量控制 】 A.2》.4: 限:度 《     【本附录不《能给出由受试—。物蒸:发所造?成的可能伤害结果】也,未测定由于直接接】触,植物所产生的伤害 ! ? , A:.3 设备》与材料 《  —   人《工生长箱、温室或】。。植物生长箱生—长容器应为》塑料:。器皿或瓷盆》钵, A.】。4 试验操》作 【A.4.1 准备】自然土/人工—基质  !   可用含—1.5%以上有【机碳(有机质约3】%)的?沙壤土?、壤质沙土或沙质黏!壤土装入花》盆种入植物含—1.5%以上有机】碳的商业《盆栽土或合成混合】土均可?用如果供试》品黏土有很高—的亲和力则不可【用黏土耕地土应过】2m:m,筛使之?均,一并去除《粗,糙颗粒最终准备土壤!的类型?。和构造、有机碳【、,。。pH、?盐含量?和,电导率应报告—土,壤应巴氏消》毒或热处理消毒【以减少土壤病—菌的:。影响  !   由于》物理/?化学特征和微生物】。群落的改《变自然土可能—使结果的解释复杂化!增加变异《性,这些:变异:依次为土壤持—水能力、《化学结合能》力、通风、》营养和微量》元素含量除了物理】因素的变《异外在?化学特性上》的变异如pH和氧】化还原电位》可以影响供》试品的生《物,可用性 【     —为尽可?能,减少自然土的变异性!对,。。试验带来《的误差当受》。试物不?是植物保护产品时】可用人工基质代替自!然土进?行试验所用基质应】包含惰性物质—减少与供试品、溶】剂载体或两者的【。相互反应用酸洗【过的石英砂、矿【物,丝和玻璃珠(—。如直径0.35m】m,~0.85mm)是!合适的惰《性,物质可减少对供试品!的吸收保证供试品】最大可?能地经根吸收达到幼!苗不适合的基—。质包括蛭石》、珍珠?岩,。或其:他高吸收性》的材料应提供植物生!长所需的营养以保证!植物没有《营,。养缺乏的压》力可通过化学分析或!对照植物的可见【评,价进行评价 — A.【4.2? 供试?。植物 》     【。选,择植物的种类应考虑!其,在植物界中》分类学?上的多样性、—分布:。特征、种的特定生】活史:和自然?界分布?地区:差异具体包括下【列特征 【     有均】一,的种子从可靠的【标,准种:子来源获得能产生】持续、可靠和一【致的萌芽以及—一致的幼苗生长; !   【  植物应适于在实!验室:。进行试验在实验室内!及实验室之间—能够得出可靠—和可再现的》结果; 】  :。。 ,。  所用种的—敏感性?应,与,环境:暴露:中的植物反应—一致; 《     !所选种已用以往的一!。些毒性试验》它们:在如:除草剂?生物测定、》重金:属筛选?、盐度?或,矿物压力试验或植】物相克?研究中?的使:。用表:明对宽泛多》样性刺激存在敏【感度; 》     能!够适应试验方—法中的生长条—件; — , ,    符合试验】。有效性标准 【  》   ?试验:所用:。的种:类数量根据相关的管!理要求决《定附录?C中的植《物,测试:。试验用物种供参【考 【A.4.3 供试品!的,施入:    ! 供试品应添加到适!当,。的载体上(如水【、丙酮、乙醇、聚】乙二醇、阿拉伯树胶!、砂)也可用包含有!效成分?和各种助《剂的制剂进行试验】。 , 《 A.4《.4 与土》壤/人工基质的【混合  !   溶于水或可悬!浮在水中的》物质可?。以直:接配成水溶》液然后将水溶液与】土,在适当的容》器中:混合此种类型试验适!合化学品通过土壤或!土壤毛细水吸收涉】及根的吸收供试【品添加量不应超过土!壤持水力每个浓度】添加的溶液量应一致!。但要注意避》免土壤结块》 —   ? 水溶?。性低的物质应先溶入!适当的挥发》性溶剂中(如—丙酮、?乙醇:)并与沙混合用【气流将溶剂从沙【中去除处理》的沙子与试验土壤混!合设置只加沙子和】溶剂的溶剂对照各处!理和溶剂对照—应加等量的混入溶剂!并已去除溶剂的沙】子对于固体和—不溶于水的》供,试品直接和》干土混?合此后将土加入【容器中并立即种入种!子 ?   —。 , 用人?工基质代替》土壤时在《试验开始前可直接将!溶于:水的:化学品溶解到—营,养液:。中不溶于水但可【以通过溶剂载体悬浮!于水中的可》加入载体再溶于营养!液中不溶于水但没】有无毒的《水溶性?载体可先溶于适当的!挥发性溶剂溶液与沙!子或玻璃珠混合【在旋转?蒸发仪上蒸发使化学!。品均匀地《。覆着在?。。沙粒或珠子上—。在分装之前取—一部分称重的玻璃】珠用等量溶》剂,提取进行化学分析 ! : ?A.4.5》 表面施用 【   —  对?于作物保《护产品通常用—土壤表面喷洒试【验溶液的方法进行】施药进行试验—操作的所有设—备包括准备和—喷洒供试《品的:设备都应使试—验以精?确的方式进行—能够产?生可重现性覆盖覆】盖应均?一分布在《土壤表面应避免化学!品被设备吸收或与设!备反应的可能(如】塑,料管与亲脂》性化学品易》反,应或某些《化学品对钢材质设备!有腐蚀性《)模仿?典型的喷雾器将供试!品喷洒在土壤—。表面通常喷洒量【应在:正常农?用量的?范围内用量(水的】量等:)应报?告选择喷嘴》类型以保《证均一的土壤表【面覆盖量《如果应用溶》剂和载?体应设置《溶剂:/,载,体对照?不必试验作》物保护产品的制【剂 《 A.4—.6 供试品浓度】/比率的《验证 】    浓度应经】适当的分析》方法:验证对于可溶性物质!所,有浓度?的验证可以通—过分析用于逐级稀】释,的最高浓度来确认】。用校准?设备(如校准分析用!玻璃器具、校准喷雾!设,备,)进行逐《级稀释对于》不,溶于水的物质分【析添加到土中的量如!果,要证明供试品—在土:壤中的均一性有【必要:。进行土壤《分析 】A.4.7 —试,验条件?   】  试验条》件应与试验种和变种!的正常生长条件【。相似出苗的植—物应:放在可控《的气候培养箱、【人工气候箱或温【室,中进行园艺操—作,维持正常生长采用】生,长设备?时应保证《植物正常生长—并与对照组对照;应!记,录包括条件控制【和足够频率(如【每日)的温度、相】对湿度、二氧化【碳浓度、光(照度】。、波:长、光合有效辐射)!/光:周期:、平均灌溉量等参数!温室温度通》过通风、升温—和/或制冷系—统来控制下》列条件通《常为温室试验的推荐!条件 ? ,     】温度:(22±10)【℃;  !  : 相对湿度(70±!25)%; !。     光周期!。最少16h光—。照;: —    照度(24!850±35—。50)lx如果【照度:降到14200 】lx以下波长400!nm~?700?n,m除某些种》需减少照度外需补】充光照 —     试验!期间应监《测和:记录环境条件试【验所用?。容器应为《无,孔塑料或玻璃容器容!器下面应垫上托盘或!碟子容器应定期重】新摆放以减》少植物的生长差【异(因为生长设施】。的试验?条件不同)容器应】足够大以保》证正:常生长 —     为】维持好的植物活【。力可以添加》土壤营养液通过【观察对照植物判【断添加营《养,液的需要《和时机推荐从试验容!器底部浇水》(如用玻《璃纤维?丝):。 —    对试—验植物?种和供?试品来说特定的生长!条件是适合的(【参见附录《。D)对照和试—验,组,植物应放《。置在一样的试验环境!。条件下然《而应采取必》要的:措,施防止不同处理间】及对:照与供试《品间的交叉污—。染(如挥发》物质) 》 ? A.4.8 【试验操作 ! A.4《.8.1《 ,试验设计《   】  同样《种类的种子种—植于容器中》每个:容器:中种入的种子数目应!根据植?物种类、容器大【小和试?验周期?决定试验期》间给植?物提供充《分的:生长条件《避免过于《。拥,挤根:据种子大《小最大的植株密【度,为3粒/100cm!2~1?0粒/100c【m2例?如每个直《径为15cm的【。容器:内可种1株~2【株玉米、大豆、西红!柿、黄瓜或甜菜;可!种,3株油菜或》豌豆;?可种5株~10株洋!葱、小?。麦或:其他小粒《种子种子数》。量和:重复容器《(一:。。个重:复指一个《容器容器《内的植?物不是重复)应足以!采用理想的统计分析!方,法进:行统计每个重复【用很:少的大种《子比每个重复用小种!子时变异《会较大应标》记可以通过每—。个容器内同样—数量的种子》降低变?异 ?    【 ,设置对照组》保证观察到的—效,。。应与:暴,露的供试品有—关或由供试品引起】除了不暴《露于供?试品外适《当的对照《组应与试验》组在各方面都一样】所有被?。试植物包括对照均应!。来自:同一来源为》避免偏离对照和【试验组植物应随机】。分布 【     应避免】使用杀虫剂或杀菌】剂包被的种子(即“!包衣”种子)—特殊情况下允许使】用某些非内吸性接触!杀菌剂(如克菌【丹、:福,美双)如果有种生病!菌可以把种子在【5%:次氯酸盐中浸一下然!后在流水下漂洗再晒!干允许其他作物保】护,。产品的?非治疗性处理 ! A.》。4,。.8:.2 ?单浓度/比》率试验? ?  《   进行》单浓度试验(限度】试验)时未确定【。适当:供,试品浓?度,。需要考虑很多因素对!一般化学品》来说应考虑物—质,的物理?/化学特性对—作,物,。。保,护,产品而言需》要考虑?物理/化学特性、供!试品的使用》模式、最大浓度【或施用比率、每【个生长季节施用次】数和/或试用品【的持:久性为?测定一般化》学品是?否有植物毒素特【性通常以10—0,0mg/kg干土作!为最:大剂量 【 A.4.8【.3 预试》验   !。  进行《正式的?多浓度的剂量反应研!究前需先进行预试】验确定剂量范围【预试验的《浓,度,间距应较宽》(如0?.1:mg/?kg、1.0mg/!kg、1《0mg/kg、1】00mg/》kg和1《000m《g/kg《干土)?作物保护产品的【浓度应根据推—。荐或:最大使用《浓度或施用比—率确定如《推,荐/最大浓度或施用!比率的?1/:100、1》/,10和1/》1 A.!4.8.4》 多浓度/》比率试验 】     多浓度!/比率?试验的目的是—建,立剂量反应关系和】测,定,萌芽率、《生物量的EC—x或ERx值和【/,或与未给药的—对照:组比较?。的可观察效应— :     】试验浓?度/比率的数量【和间距应《足,够产生可信的剂量反!。应关:系,和,回归线性方程—并,能得出估《计的ECx》或ER?。x值所选浓》度数量至《少,五个几何级数并【加上对照相邻—的两个浓度梯度不】应超过3个几何级】每,。个处理和对照均至少!有四个平行总的【。种子:数,应至少20粒对某些!萌芽率低《的植物或多》样化:。的,生长特征的植物【增加平行《数提高统计效力 】 ? A.4.—8.5 观察 】   —。  在观《察期:内,即,对照(溶剂对照【)出苗率达到—50%后的1—4d~21d内定】期(至少1周若可能!每日)观察植物是】否出苗和可》。见的植物《中毒死亡在试—验结束时《记,录出:苗率、存活植物的生!物量和植物不同部位!。可见:的,毒害效应后者—包括:已出幼苗《形,态上:。的异常、生长—迟缓、枯萎、变【色,、死亡和植物发育】上,的影响最终生物量】通过测定最终—存活植株的平均【苗干重完成收割土】壤表面以上》的植:株在60℃》烘干至恒《。定的质量也》可选择以鲜重作【为最终生物量如【。有特殊要求苗高【可,。作为另一个重—点,指标可用一个—统一的评分系统对】可见的伤害》进行评分来评价可】观察的?毒性反应 — A.5 质!量控制 【    》 为保证《试验的有效》性,对照:应符合下列形态【标准 【     出苗率】至少70%;—。 —   ? 幼苗没有可—见的植物毒素影【响(如变《色病、坏死病—、,枯萎、叶子和—茎的畸形)个别种】类的植株在》生长和?形态上只《有,。。正常变异;》 》     试验期间!对照组幼苗》。平均存?活,率应高于90%;】   】  特定种类—的,环境条件应一样生长!介质包含等量的人工!土壤:。基质、支持介质或同!样,来,。源的物质《 : 《A.6 数据和报】告 《 A.6.1 !数据处理 【 A.6—.1.1 单浓【度/比率《试验 ? , ?     》每,个植物种的数—据,都应用适当的统计】方法进?行分析报告》试验浓度/比率【产生的效应》水平或试《验浓度/比率下未】见,效应(?如在y浓度或—比率:观察的?效应<x%) 】 A》.6:.1.?。2 多浓度》/比率试验 【 ,    — 根据回《归方程剂量》-反应?关系可用不同—的模型?如出苗率《等计数型《数据ECx》或ERx(如EC】25、?ER25、EC5】0或ER50—)和置信限的估算】可,用逻辑回归法、概】率法、韦博》法、寇?氏法进行统计;幼】苗生长(质量和【高度)等连》续型终点指标E【C,x或:ERx和《可信限?的估算可用适当的】回归分析(如Br】u,ce-Vers【te:eg非线性回归分析!)如果?可能R2《值为0.7》或再高?些对多数敏感种【来说:。所设:。浓度/?比率包含2》0%和8《0%效?应如果?要求NOEC—。要求有更《强大的?分析性试验并且要】在数据分布基—础上选择 — A.6.2! 试验报告》    ! 试:验报:告应包括试验结果】、试验?条件的详《细描述、结果—的全面?讨论、数据的分【析和结果分》析提供结《果图表和《摘,要通:常包括下列内容【 , : ?    a)—供试品 【 : ,   化学鉴—定数据相关物质特性!(,如可能正辛醇—/水的分配系数【1gP?ow、水溶解度、】蒸汽压、环境归宿和!行为的信息》);: ?     试】验溶液的制》备,细节和试《验浓度的《验证 —     b【)试验植《。物种 【     试验生物!的详细资料种/亚】种、所属植物科、学!名和通用《名、尽可能详细【的来源和历史(【即,提供者的名》称、萌?。芽率:、种子?尺寸级别、批号【、产种年或选—择的生?长季节、萌芽期【等级)、生存力【等; — :    所》试验的单子叶和双】。子,。叶种的?数量; 【     —选择此种的理由【; 【    种子—贮存、处理和维护的!描述 ? : ?    c)试【。验,条,。件 —     试—验设施?(,如生:长,箱、人工气》候箱和室温);【 《。     试【验系统的描述(如容!。器直:径、容器《材料和土壤量); !    】 土壤特性(土【壤质地或类型土壤】颗,。粒,分布和?分级、物理化学【特征包括有机—。物含量、有机碳含】量,和pH值《); 】  :  试验前》土壤/基质》(如土壤、人—工土壤、沙子—和其他)的制备;】 》     若用营】养液配方描述; !     供!试品的施用施用【方法、设备、暴露承!载,量和体积(包—。括化学验证、—校准方法)、施药】期,间环境条件的描【述; 《     】生长条?件照度?、光周期、最高/最!低温度、浇水时间表!和方法、《施肥:; 》   《 , 每:个容器?内的种?子数量、每个—剂量植株数、每个】暴露:率的重复《数; 《  》   对照的—类型和?数量(阴性对照和/!或阳性对照、溶【剂对照); !  ? ,。  试验周期 【   【。 , d)结果 【 《。    每个重复、!试验浓度/比率和】种,子的所有终》点数据表; 【 ,   》。  与对《照比较的萌芽数【量和萌芽率;— 《    》 植株生《物量(植株干重或】鲜重)测定值与对】照比:率; 《  》。。   若测量植株高!度与对照的》比率; 《  —   与对照比【较的由供《试品引发的》可见的伤害率和【可见的定《性定量描述(黄化、!坏死、枯《萎、叶和茎的畸形和!缺乏症?); —     如果提!。供可见伤害评分标】准判断可见伤—害描述;《。 ?   》。  :对于单剂量试验应报!告伤害率; — 》    ECx或】ERx(如EC50!、ER50、E【C25、ER2【5):值和相?关置信限如果有回归!。分析提?供回归方程标准【偏差单个参数估计标!准偏差(如斜率、截!距); 【     若计算!NO:EC(和LOEC)!值; 【 ,    《统,计过程和假设检验】的描述; !     数据表】和试验种《的剂量-反应关【系,图   !  试验过程中【与方法?的偏离和试》验,中不可预见的—情,况的描述 —